血清、尿液醛固酮液相色谱串联质谱法的建立及其应用

发布时间：2021-08-20 21:36

　　目的 建立一种液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）方法检测人体血清和尿液中醛固酮（Aldosterone,ALD）的方法并对基于不同方法学的ALD检测系统进行方法学评价及比较。方法 方法学建立及评价。血清以及酸解后尿样本用硫酸锌除蛋白,离心取上清,使用阴离子固相柱萃取,收集洗脱液,上机检测。以氘代同位素为内标。在负离子模式下,经电喷雾电离,多离子反应监测模式下检测血清或尿液中的ALD,以标准品制作标准曲线对ALD进行定量。评价ALD的同分异构体泼尼松龙、可的松的干扰,对不同ALD浓度水平的血清、尿液及伯乐质控连续5天进行重复检测,每个水平每天重复测定四次,考察方法的精密度。同时评价方法的检测限、回收率及血尿ALD样本的稳定性。比较血清血浆样本ALD的浓度。检测80例患者尿液和血清中ALD的含量,评估血尿ALD的相关性。通过分析ALD与肌酐、尿素、胱抑素C及eGFR的相关性探讨ALD与肾功能的关系。收集2017年8月份在北京协和医院申请ALD检测（放射免疫法,RIA）的261例患者剩余血清,同时应用本研究建立的LC-MS/MS方法和Diasorin、IDS以及安图生物（分别以B、C、D代... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１醛固酮的合成途径??

图３－１?ＡＬＤ的二级碎片离子峰??同时尝试在ＥＳＩ正离子模式下对相同浓度的ＡＬＤ进行质谱条件优化，结果发??现ＡＬＤ在ＥＳＩ正离子模式下基质干扰较大（见图３－２），在相同浓度相同出峰时间??处，ＥＳＩ正离子模式下的信噪比为８０４，而ＥＳＩ负离子模式下信噪比为２１３．０２，因??此最终选用ＥＳＩ负离子模式。??１８??

３．２尿液ＡＬＤ?ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法建立过程??３．２．１尿液样本的酸解及酸解条件的摸索??ＡＬＤ以结合形式的１８葡萄糖醛酸醛固酮（分子结构式见图３－３，??ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｃｈｅｍｉｃａｌｂｏｏｋ．ｃｏｍ）随尿排出，在酸性环境下，与１８－葡萄糖醛酸结合的??ＡＬＤ能分离开，因此测定尿ＡＬＤ必须先经过酸解的步骤。本研宄从酸解温度、盐??酸浓度及酸解时间３方面考察酸解的最佳条件。根据酸解温度将样本分为室温（约??２〇°Ｃ）酸解组和３７°Ｃ酸解组。取５０…２４ｈ尿样本加入安剖瓶，分别加入２５〇ｙ?０．２Ｍ、??０．４Ｍ、０．６Ｍ及０．８Ｍ的盐酸溶液，震荡混匀密封后置于室温及３７°Ｃ温箱进行孵育??酸解，观察室温条件下酸解?２ｈ、４ｈ、６ｈ、１６ｈ、２４ｈ、３０ｈ、４０ｈ、４８ｈ、５４ｈ、６４ｈ、??１９??

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3354271