胱抑素C单克隆抗体的制备及荧光免疫层析法的建立

发布时间：2021-08-25 12:41

　　目的:为更好的评价早期肾损伤,选取临床上常用的灵敏度好的胱抑素C作为检测指标。通过基因重组技术构建、表达人胱抑素C蛋白,利用杂交瘤技术制备胱抑素C单克隆抗体,建立胱抑素C荧光免疫层析检测方法,为临床早期肾损伤快速检测提供一种新方法。方法:1.重组质粒构建:根据Gen Bank人胱抑素C（NM 000099.3）序列合成目的基因并设计亚克隆引物,PCR扩增后与PET-28a进行双酶切、连接,转化入BL21（DE3）感受态细胞,制备BL21（DE3）-pET28 a-CysC重组菌,并采用双酶切及基因测序鉴定。2.蛋白表达、纯化:诱导重组菌表达胱抑素C蛋白,优化诱导剂IPTG作用浓度及诱导时间,采用Ni⁺亲和层析法纯化表达产物,并将纯化获取的胱抑素C重组蛋白透析复性,ELISA鉴定重组蛋白的抗原活性。3.单抗制备:用上述胱抑素C蛋白免疫小鼠,选用免疫效果最佳的小鼠脾脏细胞和骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤细胞,筛选出稳定分泌特异性抗体的单克隆细胞株,注入小鼠腹腔,制备单克隆抗体,用正辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水,并对纯化后的单克隆抗体进行效价、纯度、亚型鉴定。4.检测方法建立:... 

【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

荧光免疫层析试纸条组成结构

荧光层析试纸条结果判定

基因测序图谱

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]慢性肾炎和肾脏占位性病变的DTI实验与临床研究[D]. 冯强.天津医科大学 2014
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硕士论文
[1]抗人TK1单克隆抗体的制备及化学发光检测方法的初步建立[D]. 赵二霞.郑州大学 2017
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[3]丙型肝炎病毒抗体胶体金免疫层析法的初步建立[D]. 齐红圆.河南师范大学 2014
[4]胰腺癌等肿瘤标志物（CA19-9）单克隆抗体制备及检测方法的初步建立[D]. 翟晋豫.河南师范大学 2014
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[8]一种基于量子点荧光微球的高灵敏度免疫层析技术初步研究[D]. 白亚龙.上海师范大学 2010
[9]荧光相关光谱均相免疫新方法研究[D]. 汤理川.上海交通大学 2010



本文编号：3362135