不同药物治疗对脓毒症大鼠肠道微生态的影响
发布时间：2021-10-23 17:58
背景:脓毒症是一个世界性的严重临床病症,《第三版脓毒症与感染性休克定义国际共识》将其定义为由于宿主对感染应答失调所导致的威胁生命的多器官功能衰竭,其幸存患者往往存在一定程度的身体、心理以及认知障碍,且后期的死亡风险显著增加。目前,人们已经认识到肠道微生态对机体健康极为重要,在疾病预后等方面也扮演重要角色,改善肠道微生态有利于患者预后。但是脓毒症治疗过程中,医疗介入尤其是抗生素使用常会破坏肠道稳态,而肠道微生态紊乱也可诱发脓毒症。近些年,中医认为肠道微生态理论与中医存在很多异曲同工之处,并且一些传统的中药复方在治疗疾病的同时可以调理肠道微生态,这引起人们的极大关注,但是相关的深度测序数据甚少。目的:该研究旨在探讨广谱抗生素、益生菌、清热解毒方剂对实验性脓毒症大鼠的治疗效果,并对比三种治疗用药在短期内对肠道微生态的作用特点,为药物对肠道菌群方面的作用或副作用研究提供一定的数据基础。方法:将健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组（Z组,n=12）和脓毒症模型组（n=98）,后者采用盲肠结扎穿孔法（Cecal ligation and puncture,CLP）制备大鼠脓毒症模型,然后随机分...
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SrRNA基因不同位置碱基变异程度
天津医科大学硕士学位论文早在 19 世纪八十年代，Carrico 等[59]提出“胃肠道是多器官功能障碍综合征（Multiple organ dysfunction syndrome，MODS）的始动器官”的著名论点。Prescott等[60]将微生物群紊乱与脓毒症的关系更严谨的表述如图 2 所示，随着微生物群紊乱程度的加重以及紊乱次数的增多，使脓毒症的发病风险不断增加。肠道微生物紊乱可引其肠壁的紧密连接受损、肠道的渗透性增加，导致肠源性脓毒症的发病风险上升。反之，无论是疾病本身或者医源性干预所致，肠道也是脓毒症发生时最常受累的器官之 ，但因其缺乏特征性的表现， 直被忽视。脓毒症治疗常采用广谱抗生素、液体复苏以及器官功能支持等，尤其是抗菌药物的使用是干扰肠道微生物群落稳态的主要因素之[61]。总之，肠道微生物在脓毒症的发病机理中发挥重要作用，而脓毒症本身抑或是治疗干预导致的肠道菌群失衡会促进器官衰竭的发展，或导致不良预后[62, 63]。在脓毒症治疗过程中尽量减少肠道菌群紊乱的发生或及时矫正肠道菌群紊乱是降低这种恶性循环发生的当务之急，也是控制脓毒症发生最经济的方法。
图 3 本课题技术路线肠道菌群分析：使用粪便基因组 DNA 提取试剂盒制备肠道内容物中宏基因组 DNA，采用 16S rDNA V3 通用引物扩增出肠道微生物的 V3 区域，进行测序文库构建。16S rDNA V3 区测序采用基于半导体芯片的 Ion Torrent PGM 测序平台，测序过程中在芯片上依次掺入 dGTP、dCTP、dATP 以及 dTTP，当掺入的脱氧核糖核苷酸与芯片上的模板发生碱基互补配对就会有 H+释放，引起芯片上电位改变，而被芯片底部的传感器感知并直接转化为数字信号，达到边合成边测序的目的。测序获得的数据利用 Mothur 分析软件进行 PCA、NMDS、PCoA分析，通过数据库比对进行大鼠肠道内容物中微生物菌落多样性进行描述，基于 heatmap 图和 Metastats 分析揭示各组间物种显著差异。利用醇水法萃取肠道内容物用于代谢物分析：采用 HPLC-Q-TOF-MS 技术进行结合多变量统计学方法对大鼠肠道内容中的代谢产物进行代谢指纹分析。通过上述肠道微生物群落及代谢物分析，了解抗生素、益生菌、清热解毒方剂在治疗脓毒症的同时，对肠道微生态的影响，为研究治疗药物对肠道的作用以及副作用提供 定的数据基础。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中药复方对肠道微生态的调节作用研究现状[J]. 吴国琳,余国友,卢雯雯. 中国中药杂志. 2015(18)
[2]Irritable bowel syndrome: A microbiome-gut-brain axis disorder?[J]. Paul J Kennedy,John F Cryan,Timothy G Dinan,Gerard Clarke. World Journal of Gastroenterology. 2014(39)
[3]清热解毒方与益生菌联合治疗大鼠脓毒症[J]. 高巧营,刘大全,吴尚为,李东华,刘洪斌. 中国中西医结合外科杂志. 2014(02)
[4]Probiotics improve survival of septic rats by suppressing conditioned pathogens in ascites[J]. Da-Quan Liu,Qiao-Ying Gao,Hong-Bin Liu,Dong-Hua Li,Shang-Wei Wu. World Journal of Gastroenterology. 2013(25)
[5]清热解毒方改善脓毒症大鼠脏器功能的比较[J]. 杨静,刘洪斌,李东华. 中国中西医结合外科杂志. 2012(02)
[6]清热解毒方剂对脓毒症大鼠肠系膜淋巴结免疫功能的影响[J]. 喻文立,崔乃强,傅强,刘洪斌,李东华. 中国新药与临床杂志. 2010(09)
[7]清热解毒方对脓毒症大鼠静脉血细胞黏附分子的影响[J]. 杨秀竹,杨静,张艳萍,刘洪斌. 中国实验方剂学杂志. 2010(08)
[8]清热解毒方对脓毒症大鼠的治疗作用[J]. 刘洪斌,吴咸中,李东华,王倩,杨秀竹,薛小平,张艳萍. 中国中西医结合外科杂志. 2008(06)
本文编号：3453638
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：77 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
SrRNA基因不同位置碱基变异程度
天津医科大学硕士学位论文早在 19 世纪八十年代，Carrico 等[59]提出“胃肠道是多器官功能障碍综合征（Multiple organ dysfunction syndrome，MODS）的始动器官”的著名论点。Prescott等[60]将微生物群紊乱与脓毒症的关系更严谨的表述如图 2 所示，随着微生物群紊乱程度的加重以及紊乱次数的增多，使脓毒症的发病风险不断增加。肠道微生物紊乱可引其肠壁的紧密连接受损、肠道的渗透性增加，导致肠源性脓毒症的发病风险上升。反之，无论是疾病本身或者医源性干预所致，肠道也是脓毒症发生时最常受累的器官之 ，但因其缺乏特征性的表现， 直被忽视。脓毒症治疗常采用广谱抗生素、液体复苏以及器官功能支持等，尤其是抗菌药物的使用是干扰肠道微生物群落稳态的主要因素之[61]。总之，肠道微生物在脓毒症的发病机理中发挥重要作用，而脓毒症本身抑或是治疗干预导致的肠道菌群失衡会促进器官衰竭的发展，或导致不良预后[62, 63]。在脓毒症治疗过程中尽量减少肠道菌群紊乱的发生或及时矫正肠道菌群紊乱是降低这种恶性循环发生的当务之急，也是控制脓毒症发生最经济的方法。
图 3 本课题技术路线肠道菌群分析：使用粪便基因组 DNA 提取试剂盒制备肠道内容物中宏基因组 DNA，采用 16S rDNA V3 通用引物扩增出肠道微生物的 V3 区域，进行测序文库构建。16S rDNA V3 区测序采用基于半导体芯片的 Ion Torrent PGM 测序平台，测序过程中在芯片上依次掺入 dGTP、dCTP、dATP 以及 dTTP，当掺入的脱氧核糖核苷酸与芯片上的模板发生碱基互补配对就会有 H+释放，引起芯片上电位改变，而被芯片底部的传感器感知并直接转化为数字信号，达到边合成边测序的目的。测序获得的数据利用 Mothur 分析软件进行 PCA、NMDS、PCoA分析，通过数据库比对进行大鼠肠道内容物中微生物菌落多样性进行描述，基于 heatmap 图和 Metastats 分析揭示各组间物种显著差异。利用醇水法萃取肠道内容物用于代谢物分析：采用 HPLC-Q-TOF-MS 技术进行结合多变量统计学方法对大鼠肠道内容中的代谢产物进行代谢指纹分析。通过上述肠道微生物群落及代谢物分析，了解抗生素、益生菌、清热解毒方剂在治疗脓毒症的同时，对肠道微生态的影响，为研究治疗药物对肠道的作用以及副作用提供 定的数据基础。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中药复方对肠道微生态的调节作用研究现状[J]. 吴国琳,余国友,卢雯雯. 中国中药杂志. 2015(18)
[2]Irritable bowel syndrome: A microbiome-gut-brain axis disorder?[J]. Paul J Kennedy,John F Cryan,Timothy G Dinan,Gerard Clarke. World Journal of Gastroenterology. 2014(39)
[3]清热解毒方与益生菌联合治疗大鼠脓毒症[J]. 高巧营,刘大全,吴尚为,李东华,刘洪斌. 中国中西医结合外科杂志. 2014(02)
[4]Probiotics improve survival of septic rats by suppressing conditioned pathogens in ascites[J]. Da-Quan Liu,Qiao-Ying Gao,Hong-Bin Liu,Dong-Hua Li,Shang-Wei Wu. World Journal of Gastroenterology. 2013(25)
[5]清热解毒方改善脓毒症大鼠脏器功能的比较[J]. 杨静,刘洪斌,李东华. 中国中西医结合外科杂志. 2012(02)
[6]清热解毒方剂对脓毒症大鼠肠系膜淋巴结免疫功能的影响[J]. 喻文立,崔乃强,傅强,刘洪斌,李东华. 中国新药与临床杂志. 2010(09)
[7]清热解毒方对脓毒症大鼠静脉血细胞黏附分子的影响[J]. 杨秀竹,杨静,张艳萍,刘洪斌. 中国实验方剂学杂志. 2010(08)
[8]清热解毒方对脓毒症大鼠的治疗作用[J]. 刘洪斌,吴咸中,李东华,王倩,杨秀竹,薛小平,张艳萍. 中国中西医结合外科杂志. 2008(06)
本文编号：3453638
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