CGA衍生多肽CHR通过调控自噬流减轻脂多糖诱导的小鼠肺损伤
发布时间：2021-11-19 18:34
目的:研究嗜铬粒蛋白A（chromogranin A,CGA）衍生多肽CGA47-66（chromofungin,CHR）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导脓毒症小鼠肺损伤的影响,并探讨CHR对肺组织自噬流的调节作用。方法:通过LPS（10 mg/kg）腹腔注射构建脓毒症肺损伤小鼠模型,分组依次为正常对照组（Control组）、LPS处理组（LPS组）、低剂量CHR预处理组（CHRL组,CHRL=15.5μg/kg）、高剂量CHR预处理组（CHRH组,CHRH=77.5μg/kg）。LPS腹腔注射6 h后留取肺组织标本,检测肺组织含水量及EB渗漏情况;HE染色切片观察肺组织病理变化;Western blot分别检测各组肺组织中自噬标志性蛋白LC3BⅡ和底物蛋白P62的表达;免疫荧光进一步观察各组肺组织中LC3B与P62的荧光强度表达情况。结果:与正常对照组相比,LPS组肺组织湿/干比值（5.093±0.275 vs. 4.456±0.252,P=0.000）和EB含量（1.839±0.212 vs. 1.163±0.199,P=0.000）明显增高,而CHRH...
【文章来源】：重庆医科大学学报. 2020,45(06)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
CHR对LPS诱导脓毒症小鼠肺组织自噬相关蛋白表达水平的影响（±s,n=3)
图2 CHR对LPS诱导脓毒症小鼠肺组织自噬相关蛋白表达水平的影响（±s,n=3)最近的研究表明，自噬参与了凋亡与炎症反应的调控，在脓毒症诱发急性肺损伤过程中发挥保护性作用。自噬是细胞在自噬相关基因（autophagy-related genes,Atg）的调控下利用溶酶体降解自身受损细胞器和大分子物质的过程，主要由以下4个步骤组成：(1)吞噬小泡的形成；(2)自噬体的形成；(3)自噬溶酶体的形成；(4)包裹物的降解。自噬流是一个动态连续的过程，涵盖以上4个步骤的整个进程。如果自噬流中任一环节出现障碍，自噬将无法发挥完整的生物学功能[18-19]。微管相关蛋白轻链3B(microtubule-associated protein-1 light chain 3B,LC3B）作为自噬体的特异性标记蛋白，具有LC3BⅠ和LC3BⅡ2种形式。当自噬激活时，胞质中的LC3BⅠ在泛素样反应酶的作用下转变成LC3BⅡ，并且定位于自噬体内外膜上，所以LC3BⅡ的含量与自噬体数量成正比；P62是选择性自噬最重要的货车蛋白，是连接LC3B与待降解泛素化底物的桥梁，通过结合泛素化蛋白进入自噬体最终与溶酶体融合形成自噬溶酶体而得到清除，自噬流受到抑制时P62含量增加，反之下降。因此，检测LC3B和P62的表达水平可观察自噬流的变化过程。Cho等[17]在研究中证明，京尼平在脓毒症肝损伤时通过抑制钙蛋白酶系统修复受损的自噬流，从而保护脓毒性脏器功能的损伤。因此，未来在脓毒症脏器损伤的管理和治疗上，自噬是一个极具潜力的研究方向[20-22]。然而，CHR在自噬领域的研究暂无相关报道，因此本研究根据前期研究结果提出猜想，探讨CHR是否调控自噬对脓毒症所致ALI发挥保护性作用。与Cho等[17]实验结果相似的是，本研究发现CHR在减轻肺损伤的同时修复了受损的自噬流。运用Western blot检测LC3BⅡ和P62的蛋白表达水平，LPS诱导脓毒症小鼠肺组织中的LC3BⅡ增高，说明其自噬激活，但P62增高则提示自噬流不通畅，无法发挥正常生理功能；高剂量CHR预处理后，脓毒症模型小鼠肺组织中LC3BⅡ蛋白的表达量进一步增高，而P62蛋白的表达量则明显下降，差异有统计学意义。免疫荧光结果进一步证实了LC3B和P62的荧光强度表达水平和蛋白表达水平趋势一致。以上结果提示，CHR增加了脓毒症小鼠肺组织中自噬体的形成，同时还促进了自噬体的降解，使受损的自噬流恢复通畅。自噬体通过与溶酶体结合，包裹降解炎性蛋白或病原体等有害物质，控制肺部炎症的进展，从而发挥脏器保护作用。
LPS作用6 h后，提取各组小鼠肺组织蛋白，Western blot检测各组肺组织自噬标志性蛋白LC3BⅡ和底物蛋白P62的表达变化情况。与正常对照组相比，LPS组LC3BⅡ和P62蛋白表达量明显增加（P=0.008、0.000）；高、低剂量CHR预处理后，与LPS组相比，CHRH组LC3BⅡ蛋白表达量进一步增加（P=0.000）（图2A),P62蛋白表达量明显减少（P=0.002）（图2B),CHRL组LC3BⅡ和P62的蛋白表达变化趋势不如CHRH组明显。2.4 免疫荧光
【参考文献】：
期刊论文
[1]CGA衍生多肽CHR抑制TNF-α引起的血管内皮细胞高通透性的研究[J]. 古妮娜,张丹,罗丽,陈晓迎,谢明,刘景仑,姜丽萍. 中国急救医学. 2014 (08)
[2]Acute respiratory distress syndrome and lung injury: Pathogenetic mechanism and therapeutic implication[J]. Chain-Fa Su,Shang Jyh Kao,Hsing I Chen. World Journal of Critical Care Medicine. 2012(02)
本文编号：3505621
【文章来源】：重庆医科大学学报. 2020,45(06)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
CHR对LPS诱导脓毒症小鼠肺组织自噬相关蛋白表达水平的影响（±s,n=3)
图2 CHR对LPS诱导脓毒症小鼠肺组织自噬相关蛋白表达水平的影响（±s,n=3)最近的研究表明，自噬参与了凋亡与炎症反应的调控，在脓毒症诱发急性肺损伤过程中发挥保护性作用。自噬是细胞在自噬相关基因（autophagy-related genes,Atg）的调控下利用溶酶体降解自身受损细胞器和大分子物质的过程，主要由以下4个步骤组成：(1)吞噬小泡的形成；(2)自噬体的形成；(3)自噬溶酶体的形成；(4)包裹物的降解。自噬流是一个动态连续的过程，涵盖以上4个步骤的整个进程。如果自噬流中任一环节出现障碍，自噬将无法发挥完整的生物学功能[18-19]。微管相关蛋白轻链3B(microtubule-associated protein-1 light chain 3B,LC3B）作为自噬体的特异性标记蛋白，具有LC3BⅠ和LC3BⅡ2种形式。当自噬激活时，胞质中的LC3BⅠ在泛素样反应酶的作用下转变成LC3BⅡ，并且定位于自噬体内外膜上，所以LC3BⅡ的含量与自噬体数量成正比；P62是选择性自噬最重要的货车蛋白，是连接LC3B与待降解泛素化底物的桥梁，通过结合泛素化蛋白进入自噬体最终与溶酶体融合形成自噬溶酶体而得到清除，自噬流受到抑制时P62含量增加，反之下降。因此，检测LC3B和P62的表达水平可观察自噬流的变化过程。Cho等[17]在研究中证明，京尼平在脓毒症肝损伤时通过抑制钙蛋白酶系统修复受损的自噬流，从而保护脓毒性脏器功能的损伤。因此，未来在脓毒症脏器损伤的管理和治疗上，自噬是一个极具潜力的研究方向[20-22]。然而，CHR在自噬领域的研究暂无相关报道，因此本研究根据前期研究结果提出猜想，探讨CHR是否调控自噬对脓毒症所致ALI发挥保护性作用。与Cho等[17]实验结果相似的是，本研究发现CHR在减轻肺损伤的同时修复了受损的自噬流。运用Western blot检测LC3BⅡ和P62的蛋白表达水平，LPS诱导脓毒症小鼠肺组织中的LC3BⅡ增高，说明其自噬激活，但P62增高则提示自噬流不通畅，无法发挥正常生理功能；高剂量CHR预处理后，脓毒症模型小鼠肺组织中LC3BⅡ蛋白的表达量进一步增高，而P62蛋白的表达量则明显下降，差异有统计学意义。免疫荧光结果进一步证实了LC3B和P62的荧光强度表达水平和蛋白表达水平趋势一致。以上结果提示，CHR增加了脓毒症小鼠肺组织中自噬体的形成，同时还促进了自噬体的降解，使受损的自噬流恢复通畅。自噬体通过与溶酶体结合，包裹降解炎性蛋白或病原体等有害物质，控制肺部炎症的进展，从而发挥脏器保护作用。
LPS作用6 h后，提取各组小鼠肺组织蛋白，Western blot检测各组肺组织自噬标志性蛋白LC3BⅡ和底物蛋白P62的表达变化情况。与正常对照组相比，LPS组LC3BⅡ和P62蛋白表达量明显增加（P=0.008、0.000）；高、低剂量CHR预处理后，与LPS组相比，CHRH组LC3BⅡ蛋白表达量进一步增加（P=0.000）（图2A),P62蛋白表达量明显减少（P=0.002）（图2B),CHRL组LC3BⅡ和P62的蛋白表达变化趋势不如CHRH组明显。2.4 免疫荧光
【参考文献】：
期刊论文
[1]CGA衍生多肽CHR抑制TNF-α引起的血管内皮细胞高通透性的研究[J]. 古妮娜,张丹,罗丽,陈晓迎,谢明,刘景仑,姜丽萍. 中国急救医学. 2014 (08)
[2]Acute respiratory distress syndrome and lung injury: Pathogenetic mechanism and therapeutic implication[J]. Chain-Fa Su,Shang Jyh Kao,Hsing I Chen. World Journal of Critical Care Medicine. 2012(02)
本文编号：3505621
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