病原体核酸检测新技术的建立及应用
发布时间：2022-01-03 09:14
感染性疾病通常由病原微生物感染引起,并严重威胁人类健康。随着我国经济的迅速发展,人们的生活方式也发生了较大的变化,这给我国传染病防治工作带来了新的问题和挑战。可靠而有效的病原体诊断方法是防治与控制传染病的重要工具。传统的病原微生物检验方法经常有灵敏度不高或特异性较低等问题,这使它们在诊断低浓度样本,混合感染或不明原因感染时显示出局限性。随着分子生物学与基因组学的不断发展,各种分子诊断技术与核酸检测方法逐渐成为公共卫生与临床检验领域的重要工具,特别是在感染性疾病诊断、传染病预防控制,症候群监测、不明原因感染病原体诊断以及微生物基因组学研究等工作中成为主流方法。近年来,聚合酶链反应和核酸分子杂交等分子生物学技术已经广泛应用于病原生物学的诊断中,更为先进的基因芯片技术和高通量测序技术也处于快速发展阶段。单一的一种核酸检测方法很难满足不同的实验与临床需求,如何充分利用不同分子诊断技术的优势开展病原体的检测和监测研究日益为人们所关注。在这种需求下,本研究建立了一系列病原体核酸检测新技术,以期在不同情况下应用不同的检测方法和策略,以最快速,经济,准确和科学的方式解决相应的科学问题。论文中描述了若干...
【文章来源】：中国疾病预防控制中心北京市
【文章页数】：155 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１各种核酸检测方法适用于应对不同的检测任务蓝色：低通量方法；红色：??高通量方法；浅色：一般适用；深色：非常适用
??（２）通过延伸或重新设计外引物以增加其Ｔｍ?（?ｍｅｌｔｉｎｇ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕ丨＇ｅ）值，再通??过调节退火温度控制两个阶段的ＰＣＲ的进行与否（图２－２）。但该策略依??赖超长的外引物，不仅难以设计而且引物性能也难以保证，限制了其在病??１９??
?■?Ｉｎｎｅｒ?ｐｒｉｍｅｒ??ｗ?．?Ｗ??图２－１以物理隔绝策略实现ＯＳＮ－ＰＣＲ?Ａ．带有痕ｌｉｔ溴酚蓝的内引物固定在管盖??内壁。首轮ＰＣＲ结束后不开盖，把整个反应管反复颠倒混匀，让内引物溶解在??反应体系中，然后放回到ＰＣＲ仪进行第二轮扩增。Ｂ．首轮反应之后将ＰＣＲ管离心，??细管中的内引物溶液通过下端的开口注入反应体系中，然后放回到ＰＣＲ仪进行第??二轮扩增。??（２）通过延伸或重新设计外引物以增加其Ｔｍ?（?ｍｅｌｔｉｎｇ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕ丨＇ｅ）值，再通??过调节退火温度控制两个阶段的ＰＣＲ的进行与否（图２－２）。但该策略依??赖超长的外引物，不仅难以设计而且引物性能也难以保证，限制了其在病??１９??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Rapid and Accurate Sequencing of Enterovirus Genomes Using MinION Nanopore Sequencer[J]. WANG Ji,KE Yue Hua,ZHANG Yong,HUANG Ke Qiang,WANG Lei,SHEN Xin Xin,DONG Xiao Ping,XU Wen Bo,MA Xue Jun. Biomedical and Environmental Sciences. 2017(10)
[2]Oxford Nanopore MinION Sequencing and Genome Assembly[J]. Hengyun Lu,Francesca Giordano,Zemin Ning. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2016(05)
[3]Nanopore-based Fourth-generation DNA Sequencing Technology[J]. Yanxiao Feng,Yuechuan Zhang,Cuifeng Ying,Deqiang Wang,Chunlei Du. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(01)
本文编号：3566003
【文章来源】：中国疾病预防控制中心北京市
【文章页数】：155 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－１各种核酸检测方法适用于应对不同的检测任务蓝色：低通量方法；红色：??高通量方法；浅色：一般适用；深色：非常适用
??（２）通过延伸或重新设计外引物以增加其Ｔｍ?（?ｍｅｌｔｉｎｇ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕ丨＇ｅ）值，再通??过调节退火温度控制两个阶段的ＰＣＲ的进行与否（图２－２）。但该策略依??赖超长的外引物，不仅难以设计而且引物性能也难以保证，限制了其在病??１９??
?■?Ｉｎｎｅｒ?ｐｒｉｍｅｒ??ｗ?．?Ｗ??图２－１以物理隔绝策略实现ＯＳＮ－ＰＣＲ?Ａ．带有痕ｌｉｔ溴酚蓝的内引物固定在管盖??内壁。首轮ＰＣＲ结束后不开盖，把整个反应管反复颠倒混匀，让内引物溶解在??反应体系中，然后放回到ＰＣＲ仪进行第二轮扩增。Ｂ．首轮反应之后将ＰＣＲ管离心，??细管中的内引物溶液通过下端的开口注入反应体系中，然后放回到ＰＣＲ仪进行第??二轮扩增。??（２）通过延伸或重新设计外引物以增加其Ｔｍ?（?ｍｅｌｔｉｎｇ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕ丨＇ｅ）值，再通??过调节退火温度控制两个阶段的ＰＣＲ的进行与否（图２－２）。但该策略依??赖超长的外引物，不仅难以设计而且引物性能也难以保证，限制了其在病??１９??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Rapid and Accurate Sequencing of Enterovirus Genomes Using MinION Nanopore Sequencer[J]. WANG Ji,KE Yue Hua,ZHANG Yong,HUANG Ke Qiang,WANG Lei,SHEN Xin Xin,DONG Xiao Ping,XU Wen Bo,MA Xue Jun. Biomedical and Environmental Sciences. 2017(10)
[2]Oxford Nanopore MinION Sequencing and Genome Assembly[J]. Hengyun Lu,Francesca Giordano,Zemin Ning. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2016(05)
[3]Nanopore-based Fourth-generation DNA Sequencing Technology[J]. Yanxiao Feng,Yuechuan Zhang,Cuifeng Ying,Deqiang Wang,Chunlei Du. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(01)
本文编号：3566003
本文链接：https://www.wllwen.com/linchuangyixuelunwen/3566003.html
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