基于HIV-1中和抗体的基因治疗研究

发布时间：2022-02-16 12:50

　　当前HIV-1的治疗主要针对其生活史的各阶段,阻断其复制周期,然而并不能杀灭体内游离病毒颗粒以及与宿主靶细胞基因整合的潜伏病毒。目前已广泛应用的高效抗反转录病毒疗法（Highly active antiretroviral therapy,HAART）虽能够抑制患者体内病毒复制,甚至阻断病毒在个体间的传播,但HIV-1病毒潜伏库基本不受HAART药物影响,HAART治疗中断后患者体内病毒载量会迅速反弹。清除体内游离病毒粒子,缩小病毒潜伏库规模,实现对患者体内HIV-1的长久抑制,达到功能性治愈甚至彻底治愈是当前HIV-1治疗研究的热点。近年在长期慢性感染HIV-1的“精英控制者”体内分离得到了多种具有优异中和活性的广谱抗体。人源化小鼠以及灵长类动物模型的体内实验证实,被动输入的中和抗体对HIV-1病毒呈现出剂量相关的预防及保护功效,将保护性HIV-1抗体长期且稳定的导入HIV-1患者体内对实现HIV-1功能性治愈具有重要意义。在实验研究中我们实验室分离鉴定了具有自主知识产权的单克隆中和抗体Y498,我们将针对HIV-1包膜蛋白CD4结合区的中和抗体Y498、VRC01,针对包膜gp12... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市211工程院校985工程院校

【文章页数】：125 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
材料与方法
    (一) 实验材料
        1. 细胞系与培养基
        2. 质粒
        3. 菌株
        4. 抗体与重组蛋白
        5. 工具酶
        6. 试剂盒
        7. 生化试剂
    (二) 仪器设备
    (三) 实验方法
        1. 细胞培养
        2. 氨基酸点突变实验
        3. 免疫荧光实验
        4. CaptureELISA
        5. HIV-1假病毒制备及病毒滴度测定
        6. IgG1形式的HIV-1中和抗体的表达与纯化
        7. 基于HIV-1假病毒的中和实验
        8. 表达HIV-1中和抗体的AAV8载体质粒构建
        9. 载体质粒的基因表达功能验证
        10. Fc结构域M428L/N434S位点突变的载体质粒构建
        11. 重组AAV8病毒载体包装与纯化
        12. 重组AAV载体滴度,纯度测定
        13. 纯化AAV载体的体外活性鉴定
        14. 实验动物血浆中AAV载体介导表达的抗体浓度测定
        15. 恒河猴对AAV8载体颗粒的体液免疫反应
        16. 数据统计分析
实验结果
    (一) Y498抗体表位预测
    (二) 点突变验证预测的表位氨基酸
    (三) CD4结合区靶向的中和抗体Y498与VRC01中和活性分析及比较
    (四) AAV8载体质粒构建
    (五) AAV8载体质粒功能验证
    (六) 纯化AAV载体的滴度、纯度测定及体外细胞水平功能验证
    (七) AAV载体介导的中和抗体在BALB/c小鼠体内的表达
    (八) BALB/c小鼠血浆的HIV-1病毒中和能力分析
    (九) AAV介导表达的中和抗体在恒河猴体内的免疫治疗作用
    (十) 恒河猴对AAV8载体颗粒体液免疫反应分析
结果分析与讨论
小结
参考文献
英文缩略语
发表论文
附录
综述
    参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]链霉菌胞外多糖、灵芝多糖和米糠多糖对HIV gp41六股螺旋束核心结构形成的影响[J]. 文晓芸,吴少瑜,徐伟,吕琳,刘叔文,饶进军,张嘉杰,王广发,万山河,吴曙光.  南方医科大学学报. 2007(10)



本文编号：3627998