重组结核分枝杆菌PstS1诊断结核病的研究

发布时间：2022-05-08 09:46

　　目的:克隆和表达结核分枝杆菌（MTB）磷酸盐特异性转运系统蛋白1（PstS1）,分析其免疫学活性,评价其诊断结核病的价值。方法:根据Genbank中报道的MTB H37Rv株PstS1基因序列设计引物,PCR扩增目的基因,与克隆载体pMD18-T连接,转化至宿主菌E.coli JM109,菌落PCR和质粒DNA测序鉴定阳性克隆。将双酶切的PstS1基因与表达载体pET-28a（+）连接,转化至宿主菌E.coli JM109,筛选阳性重组子,提取pET-28a（+）-PstS1重组表达质粒,经PCR和双酶切鉴定后,转化至宿主菌E.coli BL21（DE3）;IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物。亲和层析纯化PstS1,Western-blot鉴定其反应原性。棋盘滴定法确定PstS1与病人血清反应的最适浓度。以PstS1作为诊断抗原,ELISA检测结核病患者血清抗体,评价其诊断价值。结果:PCR扩增得到PstS1基因,大小约1120bp,经DNA测序鉴定其与MTB标准菌株PstS1基因序列一致。成功构建重组表达质粒pET-28a（+）-PstS1,经IPTG诱导表达得到PstS... 

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1.引言
2.材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌株及血清
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要试剂与耗材
        2.1.4 主要溶液的配制
    2.2 方法
        2.2.1 标本资料收集
        2.2.2 PstS1 基因的扩增
        2.2.3 PstS1 基因的克隆与鉴定
        2.2.4 重组PstS1 表达载体的构建
        2.2.5 重组PstS1 的诱导表达与鉴定
        2.2.6 重组PstS1 的纯化
        2.2.7 重组PstS1 的含量测定
        2.2.8 Western blot鉴定重组PstS1 的反应原性
        2.2.9 棋盘滴定法确定最适抗原-抗体反应浓度
        2.2.10 PstS1-ELISA法检测病人血清抗体
3.结果
    3.1 一般资料比较
    3.2 PstS1 基因的扩增
    3.3 PstS1 基因的克隆与鉴定
    3.4 重组PstS1 基因表达载体的构建
    3.5 重组PstS1 的表达与纯化
    3.6 重组PstS1 的反应原性分析
    3.7 重组PstS1 的含量测定
    3.8 棋盘滴定法确定最适抗原-抗体反应浓度
    3.9 PstS1-ELISA法检测病人血清抗体
4.讨论
5.结论
参考文献
综述
    参考文献
附录1: 中英文缩略词
附录2：在校期间发表论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]重组结核分枝杆菌MPT64的克隆与表达[J]. 蒋华科,袁仕善,谢琳,郭靖玮,任琪琪.  湖南师范大学学报(医学版). 2016(02)
[2]分子线性探针测定法在结核病诊断中的研究进展[J]. 陈琛,马远征.  中国防痨杂志. 2016 (03)
[3]γ干扰素释放试验与结核菌素试验对菌阴肺结核的诊断价值[J]. 崔丹,赵杰,李志惠.  解放军医药杂志. 2015(07)
[4]结核分枝杆菌PstS1-U1融合抗原的表达、纯化及其免疫活性测定[J]. 丛延广,刘利,陈志瑾,饶贤才,胡晓梅,李明,胡勇,胡福泉.  第三军医大学学报. 2007(15)
[5]结核病的实验室快速诊断[J]. 彭丽,罗永艾.  新医学. 2005(06)



本文编号：3651423