适用于多样本类型PCR-金磁微粒层析法直扩技术平台的建立及其在基因分型中的应用

发布时间：2022-07-02 17:17

　　随着全球人口老龄化程度日益加深,人类寿命延长的同时也面临着慢性疾病对健康的致命威胁,针对高血脂、高血压、糖尿病等大规模疾病患者人群的早期监测,结合药物干预和随访,实施对生命全周期的健康管理备受关注。慢性疾病患者人群众多,但个体之间存在明显差异,不同患者的疾病表现以及对治疗药物的响应性往往大相径庭,这一方面源于个体间不同的发病机制,另一方面源于生活环境和遗传背景的不同。几年来,与精准医疗相关的基因检测在疾病早期筛查和干预中得到重视,构建普适、准确、快速、便捷的基因筛查适宜技术平台,在大规模慢病人群中实现基因筛查,对患者危险分层和精准治疗尤为迫切。常用的基因检测技术平台包括DNA测序、DNA芯片杂交、质谱技术以及荧光定量PCR等,这些方法因其准确性高、通量大而备受青睐,但仍受限于昂贵的设备投入、复杂的操作和专业人员的培训,此外,靶基因扩增保证正确的前提是对模板纯度和浓度范围高的要求,很难基于上述技术平台实现免DNA提取对靶片段的直接扩增,不同临床样本,如何实现简单的裂解处理并直接用于PCR扩增是影响基因检测实现快速筛查的主要技术瓶颈。常见的临床样本中往往含有PCR抑制因子,常用的基因检测技... 

【文章页数】：129 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语对照表
第一章 绪论
    1.1 常见SNP检测技术概述
        1.1.1 PCR-RFLP技术
        1.1.2 AS-PCR技术
        1.1.3 PCR-SSCP技术
        1.1.4 环介导等温扩增技术
        1.1.5 荧光定量PCR技术
        1.1.6 基因芯片技术
        1.1.7 DNA测序技术
    1.2 直扩PCR技术概述
        1.2.1 直扩PCR技术
        1.2.2 已有直扩PCR技术
        1.2.3 直扩PCR技术瓶颈
        1.2.4 直扩PCR技术的发展趋势
    1.3 金磁微粒层析法概述
        1.3.1 金磁微粒简介
        1.3.2 金磁微粒的应用
        1.3.3 金磁微粒层析法
    1.4 乙醛脱氢酶2概述
        1.4.1乙醛脱氢酶2
        1.4.2 乙醛脱氢酶2基因多态性
        1.4.3 乙醛脱氢酶2与疾病的关系
    1.5 立题意义及主要内容
        1.5.1 目的及意义
        1.5.2 主要内容
        1.5.3 研究的创新点
第二章 直扩PCR-金磁微粒层析法基因分型平台构建
    2.1 前言
    2.2 实验试剂及仪器
        2.2.1 主要材料和试剂
        2.2.2 主要仪器和设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 阳性质控体系的构建
        2.3.2 引物设计及筛选
        2.3.3 金磁微粒的制备与试纸条组装
        2.3.4 样本处理液筛选与优化
        2.3.5 直扩PCR体系建立及优化
        2.3.6 检测结果判读方法
        2.3.7 防污染系统验证
        2.3.8 直扩系统验证
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 构架了ALDH2基因突变检测阳性质控体系
        2.4.2 设计并筛选出最适引物组
        2.4.3 筛选并优化了样本处理液
        2.4.4 建立及优化了直扩PCR反应体系
        2.4.5 证实UNG防污染系统有效
        2.4.6 验证直扩系统有效性
    2.5 本章小结
第三章 直扩PCR-金磁微粒层析法的性能评估
    3.1 前言
    3.2 实验试剂及仪器
        3.2.1 主要材料和试剂
        3.2.2 主要仪器和设备
    3.3 实验方法
        3.3.1 抗干扰性能评价
        3.3.2 稳定性评价
        3.3.3 特异性评价
        3.3.4 灵敏度评价
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 具有较强抗干扰能力
        3.4.2 具有较高的稳定性
        3.4.3 具有较强的特异性
        3.4.4 具有较好的灵敏度
    3.5 本章小结
第四章 直扩PCR-金磁微粒层析法临床应用研究
    4.1 前言
    4.2 实验试剂及仪器
        4.2.1 主要材料和试剂
        4.2.2 主要仪器和设备
    4.3 实验方法
        4.3.1 临床样本的收集
        4.3.2 临床样本的处理
        4.3.3 临床样本ALDH2 Glu504Lys基因检测
        4.3.4 统计与分析方法
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 临床样本检测结果
        4.4.2 ALDH2基因型与药物作用相关性分析
    4.5 本章小结
全文总结
参考文献
致谢
攻读博士学位期间取得的科研成果
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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[2]金磁微粒纯化细菌基因组DNA方法的研究[D]. 张景阁.西北大学 2011
[3]以金磁微粒为载体的全血基因组DNA纯化方法研究[D]. 赵明.西北大学 2009



本文编号：3654760