肠道病毒71型在环境标本中检测方法的探索及毒力位点的研究

发布时间：2022-07-03 20:53

　　【目的】1、建立EV71免疫磁珠富集技术与常规检测相结合的方法,应用于患儿周围环境标本检测,从环境标本中分离出EV71病毒,为阐析环境标本在EV71传播中的作用提供确切证据。2、通过分析分离自不同临床症状的EV71毒株的基因组序列,寻找可能与重症病例相关的毒力位点。3、构建突变感染性克隆质粒,拯救病毒,在细胞生物学水平和动物水平上对拯救的突变病毒的毒力进行验证,确定位点突变对病毒毒力的影响。【方法】1、制备特异性富集EV71病毒的免疫磁珠,建立对环境标本中的EV71病毒富集和分离的方法,获得的免疫磁珠-病毒复合物进行RT-PCR、RT-q PCR检测和病毒分离。阳性标本进行VP1全长扩增及序列测定分析其同源性。2、对40株福建省EV71分离株的的基因组进行扩增,并从Genbank中下载48株具有明确临床症状的中国其他省份获得的EV71全基因组序列,对基因组进行遗传进化分析;根据分离株病例的临床症状将其分为重症和轻症毒株,比较重症和轻症分离株非编码区的核苷酸序列及编码区的氨基酸序列的变异情况。3、在EV71全长c DNA感染性克隆质粒（Nero-pcr-XL-149-08）的基础上,利用... 

【文章页数】：94 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
主要英文缩写词表 中文摘要 英文摘要 前言 第一章
    免疫磁珠富集法对环境标本中EV71检测的应用 引言 材料与方法 结果 讨论 结论 第二章
    轻重症患者EV71全基因组序列分析可能的毒力位点 引言 材料与方法 结果 讨论 结论 第三章
    EV71毒力位点的验证 引言 材料与方法 结果 讨论 结论 结语 参考文献 课题综述 参考文献 致谢



本文编号：3655628