正常产妇羊水蛋白质组图谱建立及其个体差异分析

发布时间：2022-07-07 13:27

　　研究背景:羊水是一种复杂而动态变化的生物体液,其中含有大量由羊膜上皮细胞、胎儿组织、胎儿排泄物和胎盘组织产生的蛋白质。羊水可以为胎儿提供机械保护,营养以及胎儿生长和健康所需的其他分子。因此,羊水对于胎儿的发育至关重要,羊水是鉴别胎儿病理的潜在的主要生物标志物来源。研究方法:本研究共收集了 7名正常产妇羊水样本。首先从7例样本中每个取等量得到一个羊水混合样,通过免疫亲和去除柱去除14种高丰度蛋白,得到的流出组分,洗脱组分和原始混合蛋白3种样品分别进行酶切,二维液相色谱-质谱联用分析,最后得到的数据用于建立正常产妇羊水蛋白质组图谱。另外,7例羊水样本分别单独进行酶切,通过iTRAQ 8标进行同位素标记定量,将标记好的样品混合得到一个混合样,进行二维液相色谱-质谱联用分析,最后得到的定量数据用于分析个体间的差异。研究结果:本研究共鉴定到2881个非冗余羊水蛋白,其中基于峰强度半定量（iBAQ）方法定量到1624个蛋白,发现前20高丰度蛋白占羊水总蛋白的64%。基因本体分析显示羊水中胞外蛋白富集,包括一些胞外基质蛋白、胶原质蛋白等。IPA功能分析发现羊水蛋白主要与轴突导向信号通路相关性最高。7... 

【文章页数】：95 页

【学位级别】：硕士

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缩略词表
摘要
Abstract
第一章 前言
    1. 体液蛋白质组学
    2. 羊水蛋白质组研究进展
    3. 正常羊水蛋白质组及其个体差异
    4. 本研究的主要内容和研究意义
第二章 材料与方法
    1. 实验材料
        1.1 临床样本
        1.2 实验试剂
        1.3 实验耗材
        1.4 实验仪器
        1.5 试剂配制
        1.6 分析软件
    2. 实验方法
        2.1 羊水的收集
        2.2 蛋白质提取
        2.3 Bradford方法测定蛋白浓度
        2.4 去除高丰度蛋白
        2.5 膜辅助溶液内蛋白酶解
        2.6 固相萃取纯化肽段
        2.7 BCA法测定多肽浓度
        2.8 iTRAQ定量标记
        2.9 二维高pH反相高效液相色谱分离
        2.10 LC-MS/MS分析
        2.11 数据分析
        2.12 数据处理
        2.13 GO功能分析及IPA通路分析
第三章 实验结果
    1. 羊水蛋白质组分析的实验流程
    2. 羊水蛋白质组图谱建立
        2.1 羊水蛋白质组的定性结果
        2.2 羊水蛋白质组的定量结果
        2.3 羊水蛋白质组的功能分析
    3. 羊水蛋白质组个体间差异分析
        3.1 羊水蛋白质组技术重复分析
        3.2 羊水蛋白质组个体间差异分析
        3.3 个体间差异与蛋白功能的关系
        3.4 羊水与其他体液个体间差异的比较
第四章 讨论
第五章 结论
参考文献
附录
致谢
个人简历



本文编号：3656502