志贺菌中CRISPR/Cas系统与其耐药的关系

发布时间：2022-07-13 16:03

　　志贺菌性痢疾是全球面临的重要公共卫生问题,尤其是发展中国家的重要传染病之一。其病原体志贺菌属是一类具有高度传染性、危害较严重的革兰阴性肠道致病菌,且其不断增加的耐药性问题为志贺菌性痢疾的有效治疗增加困难。而耐药基因的水平转移作为细菌获得性耐药的一个重要方式已引起广泛关注。近年来人们发现成簇的规律间隔短回文重复序列（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats, CRISPRs）与其相关基因序列（CRISPR-associated, cas）编码的Cas蛋白组成的CRISPR/Cas系统作为原核生物的获得性和可遗传性的新型微生物防御系统,广泛存在于古细菌和细菌基因组中,可以有效抵抗噬菌体感染及质粒接合转移,限制外源性遗传物质的水平转移。这或许可以为解决细菌耐药性的传播提供帮助和新思路。但是目前CRISPR/Cas系统与细菌耐药关系的研究不多且未达成统一结论,机制尚不清楚。目的基于本课题组前期的研究进展,进一步研究志贺菌耐药与CRISPR/Cas系统的关系。方法1.采用琼脂稀释法测定志贺菌最低抑菌浓度（MIC）。2.应用... 

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摘要
Abstract
英文缩略词
1 引言
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株及质粒来源
        2.1.2 主要试剂及生产厂家
        2.1.3 主要试剂配方
        2.1.4 引物及序列合成
        2.1.5 实验器材
        2.1.6 间隔序列来源
        2.1.7 志贺菌及其间隔序列同源质粒或噬菌体的耐药基因的相关性研究中耐药基因的选择
        2.1.8 生物信息学软件
        2.1.9 网络服务器
    2.2 实验方法
        2.2.1 志贺菌的复苏与鉴定
        2.2.2 细菌浊度的测定
        2.2.3 分光光度法测细菌浓度
        2.2.4 琼脂稀释法测定志贺菌的抗生素最低抑菌浓度(MIC)
        2.2.5 耐药质粒电转化入敏感志贺菌
        2.2.6 氯霉素诱导敏感志贺菌耐药
        2.2.7 多耐药志贺菌无抗生素压力传代
        2.2.8 志贺菌基因组DNA的提取
        2.2.9 PCR扩增和凝胶电泳
        2.2.10 志贺菌及其spacer同源质粒或噬菌体的耐药信息的获得
    2.3 研究技术路线
3 结果
    3.1 电转化敏感志贺菌耐药的变化
        3.1.1 电转化敏感志贺菌耐药后耐药表型变化
        3.1.2 电转化敏感志贺菌耐药后志贺菌CRISPR/Cas系统的变化
    3.2 氯霉素诱导敏感志贺菌耐药前后CRISPR/Cas系统的变化
        3.2.1 耐药表型(氯霉素)的变化
        3.2.2 交叉耐药的检测
        3.2.3 CRISPR/Cas系统的变化
    3.3 多耐药志贺菌无抗生素压力传代前后CRISPR/Cas系统的变化
        3.3.1 耐药表型的变化
        3.3.2 CRISPR/Cas系统的变化
    3.4 志贺菌间隔序列同源质粒的耐药信息与其耐药的关系
        3.4.1 间隔序列的同源质粒及间隔序列所在菌株的信息
        3.4.2 耐药基因信息
        3.4.3 耐药相关信息
        3.4.4 其他相关信息
4 讨论
    4.1 电转化敏感志贺菌耐药前后CRISPR/Cas系统的变化
    4.2 氯霉素诱导敏感志贺菌耐药前后CRISPR/Cas系统的变化
    4.3 多耐药志贺菌无抗生素压力传代前后CRISPR/Cas系统的变化
    4.4 志贺菌间隔序列同源质粒的耐药信息与其耐药的关系
5 结论
参考文献
附录
综述 CRISPR/Cas系统与细菌耐药关系的研究概况
    1 CRISPR/Cas系统
        1.1 CRISPR/Cas系统的结构与分类
        1.2 CRISPR/Cas系统的作用机制
            1.2.1 适应性阶段
            1.2.2 crRNAs/Cas核糖核蛋白复合物形成阶段
            1.2.3 靶向定位与裂解阶段
    2 基因的水平转移与细菌耐药
        2.1 质粒介导的耐药基因水平转移
        2.2 噬菌体与细菌耐药
        2.3 转座子与细菌耐药
        2.4 整合子与细菌耐药
        2.5 插入序列共同区与细菌耐药
    3 CRISPR/Cas系统与细菌耐药
结语
参考文献
个人简历
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]噬菌体:一个世纪的历史回顾[J]. 李升伟,弗瑞斯特·罗韦尔,安卡·M·西格尔.  世界科学. 2016(01)
[2]一株食源性多重耐药单核细胞增生李斯特菌的耐药性研究[J]. 李丽丽,石磊,何建华,闫鹤,孟赫诚.  现代食品科技. 2015(07)
[3]大肠杆菌多重耐药株的体外诱导初步研究[J]. 严亮.  畜牧与饲料科学. 2015(04)
[4]细菌CRISPR-Cas系统功能及其与噬菌体相互作用[J]. 傅强,孙建和,严亚贤.  微生物学报. 2015(03)
[5]志贺菌CRISPR的检测及其与耐药的关系[J]. 王琳琳,王颖芳,段广才,薛泽润,郭向娇,王鹏飞,郗园林,杨海燕.  微生物学报. 2015(04)
[6]临床分离志贺菌中CRISPR/Cas系统的分布及其与毒力基因的关系[J]. 郭向娇,王颖芳,段广才,王琳琳,王鹏飞,杨海燕,郗园林.  微生物学通报. 2015(03)
[7]细菌耐药机制的国内外最新研究进展[J]. 丁元廷.  现代预防医学. 2013(06)
[8]转座子介导的细菌耐药机制相关研究进展[J]. 严俊,黄永茂.  西南军医. 2013(01)
[9]志贺菌属整合子的耐药贡献与稳定性研究[J]. 朱静媛,段广才,范清堂,郗园林.  第三军医大学学报. 2011(03)
[10]志贺菌主动外排泵调控基因marOR突变与泵表达水平的关系[J]. 任静朝,段广才,宋春花,吕锐利,张卫东,郗园林.  中华微生物学和免疫学杂志. 2010 (03)

博士论文
[1]ISEcpl介导志贺菌耐药的分子基础研究[D]. 王颖芳.郑州大学 2013

硕士论文
[1]志贺菌、大肠杆菌和沙门菌CRISPR结构特征生物信息学分析[D]. 王鹏飞.郑州大学 2015
[2]CRISPR/Cas系统与志贺菌耐药的关系[D]. 王琳琳.郑州大学 2015
[3]粪肠球菌可移动元件介导的耐药性与CRISPR的关系探索[D]. 蒋伟.湖南农业大学 2012
[4]志贺菌属细菌耐药相关质粒的耐药性研究[D]. 侯瑞娟.郑州大学 2012



本文编号：3660340