ESDR信号放大法检测外泌体中AD生物标志物

发布时间：2022-08-10 09:20

　　阿尔茨海默病（AD）被视为影响老年人健康的第三健康“杀手”。目前,临床上已涌现出大量的AD诊断方法,主要包括神经影像学检测和脑脊髓液分析两种诊断方法。然而,现存的AD诊断方法存在着许多不足。例如,检测方法的准确度低和特异性差会导致“假阴性”判断;检测的灵敏度低会使AD无法被早期发现,以致错过最佳的治疗时期。为了实现AD的早期诊断,本文基于熵驱动链置换反应（ESDR）原理,结合氧化石墨烯（GO）、发夹状探针（H）以及荧光基团FAM修饰的替换链探针（R1和R2）,设计了一个新型的荧光信号放大检测系统,对外泌体中的AD生物标志物—Aβ42寡聚体进行特异性检测。在该检测系统中,Aβ42寡聚体先与H特异性结合并将H的发夹结构打开,打开的H与R1、R2通过碱基互补配对原则形成双链DNA;此时,与H结合的Aβ42寡聚体被替换下来以引发下一个周期的识别反应,循环不断地反应使荧光信号得到放大。GO作为荧光淬灭剂可以吸附游离的R1、R2（单链DNA）并淬灭它们的荧光;但GO不能吸附双链DNA,双链DNA上的荧光不受GO影响。因此,Aβ42寡聚体的浓度可根据检测样品荧光信号强度的变化进行计算。此外,由于外泌... 

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1 阿尔茨海默症的概述
        1.1 阿尔茨海默症的发展现状
        1.2 阿尔茨海默症的临床诊断方法及存在问题
        1.3 阿尔茨海默症的发病机制
    2 生物标志物Aβ42寡聚体的检测
    3 外泌体的概述
        3.1 外泌体的产生
        3.2 外泌体作为疾病诊断工具的优势
        3.3 外泌体用于阿尔茨海默症的早期诊断
    4 ESDR信号放大检测方法
        4.1 核酸适配体用于生物检测的巨大优势
        4.2 适配体荧光探针参与的信号放大检测方法及存在问题
    5 淬灭剂氧化石墨烯的应用
    6 本课题的设计思路与研究意义
第二章 Aβ42寡聚体ESDR信号放大检测方法的构建
    1 仪器与试剂
        1.1 试剂
        1.2 仪器
        1.3 溶液的配制
    2 实验内容
        2.1 样品预处理
            2.1.1 Aβ42及Aβ40寡聚体的制备
            2.1.2 Aβ42寡聚体的SDS-PAGE电泳表征
            2.1.3 发夹探针和替换链探针的处理
        2.2 实验步骤
        2.3 检测系统可行性考察
        2.4 检测系统的条件优化
            2.4.1 发夹探针及替换链探针的设计与结构优化
            2.4.2 氧化石墨烯浓度
            2.4.3 氧化石墨烯孵育时间
            2.4.4 链置换时间
        2.5 方法学验证
            2.5.1 特异性
            2.5.2 标准曲线
            2.5.3 精密度
            2.5.4 准确度
    3 结果与讨论
        3.1 Aβ42寡聚体的SDS-PAGE电泳分析
        3.2 检测系统可行性分析
        3.3 检测系统的条件优化
            3.3.1 发夹探针及替换链探针的设计及结构优化
            3.3.2 氧化石墨烯浓度
            3.3.3 氧化石墨烯孵育时间
            3.3.4 链置换时间
        3.4 方法学验证
            3.4.1 特异性
            3.4.2 标准曲线
            3.4.3 精密度
            3.4.4 准确度
    4 本章小结
第三章 模拟血清中Aβ42寡聚体的检测
    1 试剂与仪器
        1.1 试剂
        1.2 仪器
    2 实验内容
        2.1 样品预处理
        2.2 实验步骤
        2.3 模拟血清中Aβ42寡聚体检测的方法学
            2.3.1 标准曲线
            2.3.2 精密度
            2.3.3 准确度
    3 结果与讨论
        3.1 标准曲线
        3.2 精密度
        3.3 准确度
    4 本章小结
第四章 外泌体中Aβ42寡聚体的检测
    1 试剂与仪器
        1.1 试剂
        1.2 仪器
    2 实验内容
        2.1 样品预处理
            2.1.1 鼠血清的提取
            2.1.2 血清外泌体的提取
            2.1.3 阿尔茨海默症患者外泌体的模拟
        2.2 实验步骤
            2.2.1 外泌体及外泌体-Aβ42寡聚体的表征
            2.2.2 Exo-Aβ42中Aβ42寡聚体的提取与检测
    3 结果与讨论
        3.1 阿尔茨海默症患者外泌体的模拟
        3.2 外泌体及Exo-Aβ42的表征
        3.3 Exo-Aβ42中Aβ42寡聚体的提取与检测
    4 本章小结
全文总结
参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
硕士论文
[1]β-淀粉样蛋白42核酸适配体的筛选及其性质的考察[D]. 王沛.湖南大学 2014



本文编号：3673378