人源ST2蛋白的原核表达及多种免疫检测方法的建立

发布时间：2023-02-14 17:48

　　近年来,我国患有心肌损伤的人群数量呈上升发展趋势,人可溶性生长刺激表达基因2蛋白(ST2)作为一种新型的心肌损伤标志物,对于检测急性心肌梗死(AMI)和心力衰竭(HF)患者的治疗后效果具有重要的引导和应用意义,研究ST2蛋白的多种免疫检测方法为临床应用和试剂盒的开发提供实验室基础。本文经设计合成表达载体pET-15b-ST2,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。具体表达条件选择使用1mM IPTG,在16℃,110 rpm条件下诱导24 h。纯化后获得纯度高达95%以上,浓度为6.25 mg/ml的可溶性ST2蛋白。本研究构建ST2蛋白的酶联免疫检测、基于磁性微球的化学发光检测、胶体金检测等方法。通过对实验条件进行一系列优化后,建立最佳工艺。本文建立的酶联免疫方法与市售ELISA方法进行了方法学对比,一致性较好,并应用于检测临床样本血清可溶性ST2,效果较好。

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 ST2蛋白简介
    1.2 ST2与AMI和HF的研究
    1.3 ELISA免疫检测方法
    1.4 化学发光免疫检测技术
    1.5 胶体金免疫层析检测方法
    1.6 本课题的研究目的及意义
第二章 ST2表达载体的构建及鉴定
    2.1 实验材料
    2.2 实验方法
    2.3 实验结果
    2.4 小结
第三章 ST2蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化
    3.1 实验材料
    3.2 实验内容
    3.3 实验结果
    3.4 小结
第四章 ST2 ELISA免疫检测方法的建立
    4.1 实验材料
    4.2 实验内容
    4.3 实验结果
    4.4 小结
第五章 ST2基于磁性微球的化学发光免疫检测方法的建立
    5.1 实验材料
    5.2 实验方法
    5.3 实验结果
    5.4 小结
第六章 ST2胶体金免疫层析检测方法的建立
    6.1 实验材料
    6.2 实验内容
    6.3 实验结果
    6.4 小结
第七章 结论与展望
    7.1 结论
    7.2 展望
致谢
参考文献



本文编号：3742733