重组人p53腺病毒联合洛铂对Hela细胞生长抑制作用机制及宫颈癌介入化疗的PET/MR疗效评价研究

发布时间：2023-02-26 07:49

　　目的:宫颈癌是严重威胁女性健康的常见恶性肿瘤,发病率居我国女性生殖系统恶性肿瘤之首。目前宫颈癌介入化疗方案存在部分患者疗效不佳、毒副作用大及肿瘤耐药等问题,本实验拟通过体外细胞实验及裸鼠移植瘤实验探索重组人p53腺病毒联合洛铂诱导宫颈癌Hela细胞凋亡和生长抑制的作用及机制,从而为重组人p53腺病毒联合洛铂方案应用于宫颈癌介入化疗提供理论依据和指导,以期提高介入化疗疗效,减小毒副作用。同时,利用18F-FDG PET/MR一体机对宫颈癌使用重组人p53腺病毒联合洛铂为基础的介入化疗方案的疗效进行影像学评估,初步探讨PET/MR对其疗效评价和预测的价值。研究方法:1、体外实验:首先进行宫颈癌Hela细胞培养与传代,实验分为空白对照组、洛铂组、重组人p53腺病毒组和洛铂+重组人p53腺病毒组。倒置相差显微镜及Hoechst33342染色分析细胞凋亡、观察细胞形态。MTT法检测宫颈癌Hela细胞的活性。流式细胞仪结合AnnexinV-FITC/PI双染检测肿瘤细胞凋亡率。免疫印迹(Western blotting)检测相关蛋白的表达。2、动物实验:4-8周龄体重20²2...

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【学位级别】：博士

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摘要 Abstract 英文缩略语 第一部分 ：重组人p53腺病毒联合洛铂诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的体外实验研究
1 前言
2 材料和方法
    2.1 实验材料
    
2.1.1 细胞株
    
2.1.2 分子生物学主要试剂
    
2.1.3 用于细胞培养的试剂
    
2.1.4 免疫印迹(Westernblotting)所用试剂
    
2.1.5 细胞活性检测试剂盒
    
2.1.6 主要仪器
    2.2 实验方法
    
2.2.1 宫颈癌Hela细胞培养与传代
    
2.2.2 最佳感染指数测定
    
2.2.3 测定腺病毒表达载体沉默效率
    
2.2.4 倒置相差显微镜及Hoechst33342染色分析细胞凋亡、观察细胞形态
    
2.2.5 MTT法检测宫颈癌Hela细胞的活性
    
2.2.6 流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率
    
2.2.7 Westernblot检测相关蛋白的表达
    
2.2.8 统计学方法
3 实验结果
    3.1 p53基因腺病毒联合洛铂诱导Hela细胞凋亡的形态学观察
    3.2 重组人p53腺病毒联合洛铂诱导的Hela细胞活性抑制
    3.3 p53基因导入提高了洛铂诱导的Hela细胞凋亡率
    3.4 p53基因导入增敏洛铂诱导细胞内促凋亡蛋白激酶切割激活
    3.5 p53基因导入诱导细胞内促凋亡蛋白表达增加
    3.6 重组人p53腺病毒导入增强了洛铂诱导的Mcl-1蛋白切割和细胞凋亡
4 讨论
5 结论 第二部分 ：重组人重组人p53腺病毒联合洛铂对宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长抑制作用的实验研究
1 前言
2 材料和方法
    2.1 实验材料
    
2.1.1 细胞株和实验动物
    
2.1.2 主要试剂
    2.2 实验方法
    
2.2.1 人宫颈癌Hela细胞的培养
    
2.2.2 实验动物的饲养
    
2.2.3 宫颈癌Hela细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立
    
2.2.4 注射重组人p53腺病毒和/或洛铂后测量体积、瘤重
    
2.2.5 Westernblot检测p53等蛋白的表达
    
2.2.6 统计学方法
3 实验结果
    3.1 重组人p53腺病毒和/或洛铂对宫颈癌裸鼠移植瘤生长的影响
    3.2 平均肿瘤重量以及凋亡事件检测
4 讨论
5 结论 第三部分 ：重组人p53腺病毒联合宫颈癌介入化疗的近期疗效及PET/MR评价
1 前言
2 材料和方法
    2.1 材料
    
2.1.1 临床病例资料
    
2.1.2 入组标准及排除标准
    
2.1.3 临床表现及辅助检查
    2.2 实验方法
    
2.2.1 介入化疗术方法及评价指标
    
2.2.2 PET/MR图像采集
    
2.2.3 PET/MR图像分析
    
2.2.4 疗效评价
    
2.2.5 数据分析
3 实验结果
    3.1 入组患者基本临床特征、疗效及毒副反应
    3.2 首次宫颈癌介入化疗前后PET/MR参数变化及不同评价方式疗效对比
    3.3 PET参数(SUL)与DW-MRI参数(mADC)之间相关性分析
    3.4 TD与SUL和mADC的之间相关性分析
    3.5 不同临床疗效亚组的mADC、SUL、TD差异对比
4 讨论
5 结论 本研究创新性的自我评价 参考文献 综述
参考文献 攻读学位期间取得的研究成果 致谢 个人简历



本文编号：3750132