单核细胞增生李斯特菌感染下Hemgn对造血干细胞及免疫系统的调控作用研究
发布时间：2023-03-04 16:27
目的感染在流行病学上与多种造血干细胞(Hematopoietic stem cell,HSC)功能障碍症相关,如急性髓性白血病、骨髓增生异常综合征、再生障碍性贫血等。临床上治疗以上血液疾病通常采用HSC移植。从疾病发生机制的角度全面揭示炎症对HSC的影响对治疗各种血液病具有重要意义。EDAG(Erythroid Differentiation Associated Gene)是一种造血组织和细胞特异性表达的基因,在调控HSC增殖、分化和维持HSC谱系平衡中发挥重要作用。Hemgn是EDAG在小鼠中的同源基因,本研究利用Hemgn基因敲除(Hemgn-/-)小鼠,通过建立单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)急性感染和反复感染模型,初步探讨了Hemgn在LM诱导的炎症中对HSC及免疫系统的影响。方法采用腹腔注射建立单核细胞增生李斯特菌急性感染和反复感染模型,通过蛋白质免疫印迹法(western blot,WB)检测野生型小鼠骨髓Hemgn表达;利用流式细胞术分析小鼠造血干祖细胞(Hematopoietic stem/progeni...
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 导论
1.1 研究背景
1.2 文献综述
1.2.1 EDAG与造血
1.2.2 IFNγ对造血干细胞的影响
1.2.3 单核细胞增生李斯特菌与免疫反应
1.3 研究方法
1.4 研究内容
第二章 Hemgn调节造血干细胞应对单增李斯特菌感染
2.1 实验材料
2.1.1 主要仪器设备
2.1.2 主要试剂
2.1.3 实验动物
2.2 实验方法
2.2.1 冻干菌株的恢复培养
2.2.2 菌液的复苏与鉴定
2.2.3 单核细胞增生李斯特菌的培养与计数
2.2.4 建立单核细胞增生李斯特菌单次感染模型
2.2.5 外周血血象分析
2.2.6 酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清IFNγ水平
2.2.7 骨髓单个核细胞悬液的制备
2.2.8 脾脏单个核细胞悬液的制备
2.2.9 细胞计数
2.2.10 HSPC分析
2.2.11 细胞周期分析
2.2.12 活性氧水平检测
2.2.13 小鼠骨髓细胞集落形成能力
2.2.14 Western Blot检测
2.2.15 统计学分析
2.3 实验结果
2.3.1 建立单核细胞增生李斯特菌单次感染模型
2.3.2 感染单核细胞增生李斯特菌后小鼠骨髓中Hemgn表达上调
2.3.3 Hemgn-/-小鼠单次感染单核细胞增生李斯特菌后造血干细胞功能下降
2.3.4 Hemgn-/-小鼠反复感染单核细胞增生李斯特菌后造血干细胞耗竭
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 Hemgn敲除导致单核细胞增生李斯特菌感染后免疫系统紊乱
3.1 实验材料
3.1.1 主要仪器设备
3.1.2 主要试剂
3.1.3 实验动物
3.2 实验方法
3.2.1 建立单核细胞增生李斯特菌急性感染模型
3.2.2 外周血血象分析
3.2.3 脾脏、肝脏荷菌量检测
3.2.4 病理学检测
3.2.5 Cytometic Bead Array(CBA)法检测脾脏、肝脏中细胞因子水平
3.2.6 免疫细胞分析
3.2.7 统计学分析
3.3 实验结果
3.3.1 Hemgn-/-小鼠对单核细胞增生李斯特菌急性感染更加敏感
3.3.2 Hemgn-/-小鼠感染单核细胞增生李斯特菌后组织荷菌量增加
3.3.3 Hemgn-/-小鼠感染单核细胞增生李斯特菌后病理损伤严重
3.3.4 Hemgn-/-小鼠脾脏各炎症因子释放减少
3.3.5 Hemgn-/-小鼠脾脏中粒细胞巨噬细胞无差异
3.3.6 Hemgn-/-小鼠脾脏中B淋巴细胞无差异
3.3.7 Hemgn-/-小鼠脾脏中DC细胞比例降低
3.3.8 Hemgn-/-小鼠脾脏中NK细胞比例显著降低
3.3.9 敲除Hemgn对 T淋巴细胞有显著抑制作用
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 结论与展望
4.1 结论
4.2 展望
参考文献
附录
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文
本文编号：3754611
【文章页数】：67 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 导论
1.1 研究背景
1.2 文献综述
1.2.1 EDAG与造血
1.2.2 IFNγ对造血干细胞的影响
1.2.3 单核细胞增生李斯特菌与免疫反应
1.3 研究方法
1.4 研究内容
第二章 Hemgn调节造血干细胞应对单增李斯特菌感染
2.1 实验材料
2.1.1 主要仪器设备
2.1.2 主要试剂
2.1.3 实验动物
2.2 实验方法
2.2.1 冻干菌株的恢复培养
2.2.2 菌液的复苏与鉴定
2.2.3 单核细胞增生李斯特菌的培养与计数
2.2.4 建立单核细胞增生李斯特菌单次感染模型
2.2.5 外周血血象分析
2.2.6 酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清IFNγ水平
2.2.7 骨髓单个核细胞悬液的制备
2.2.8 脾脏单个核细胞悬液的制备
2.2.9 细胞计数
2.2.10 HSPC分析
2.2.11 细胞周期分析
2.2.12 活性氧水平检测
2.2.13 小鼠骨髓细胞集落形成能力
2.2.14 Western Blot检测
2.2.15 统计学分析
2.3 实验结果
2.3.1 建立单核细胞增生李斯特菌单次感染模型
2.3.2 感染单核细胞增生李斯特菌后小鼠骨髓中Hemgn表达上调
2.3.3 Hemgn-/-小鼠单次感染单核细胞增生李斯特菌后造血干细胞功能下降
2.3.4 Hemgn-/-小鼠反复感染单核细胞增生李斯特菌后造血干细胞耗竭
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 Hemgn敲除导致单核细胞增生李斯特菌感染后免疫系统紊乱
3.1 实验材料
3.1.1 主要仪器设备
3.1.2 主要试剂
3.1.3 实验动物
3.2 实验方法
3.2.1 建立单核细胞增生李斯特菌急性感染模型
3.2.2 外周血血象分析
3.2.3 脾脏、肝脏荷菌量检测
3.2.4 病理学检测
3.2.5 Cytometic Bead Array(CBA)法检测脾脏、肝脏中细胞因子水平
3.2.6 免疫细胞分析
3.2.7 统计学分析
3.3 实验结果
3.3.1 Hemgn-/-小鼠对单核细胞增生李斯特菌急性感染更加敏感
3.3.2 Hemgn-/-小鼠感染单核细胞增生李斯特菌后组织荷菌量增加
3.3.3 Hemgn-/-小鼠感染单核细胞增生李斯特菌后病理损伤严重
3.3.4 Hemgn-/-小鼠脾脏各炎症因子释放减少
3.3.5 Hemgn-/-小鼠脾脏中粒细胞巨噬细胞无差异
3.3.6 Hemgn-/-小鼠脾脏中B淋巴细胞无差异
3.3.7 Hemgn-/-小鼠脾脏中DC细胞比例降低
3.3.8 Hemgn-/-小鼠脾脏中NK细胞比例显著降低
3.3.9 敲除Hemgn对 T淋巴细胞有显著抑制作用
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 结论与展望
4.1 结论
4.2 展望
参考文献
附录
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文
本文编号：3754611
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