蛋白4.1R在LPS诱导的脓毒症中的作用及其调控机制研究

发布时间：2023-03-26 15:08

　　研究背景脓毒症(Spesis)是严重烧伤、创伤及外科大手术后常见并发症,现已成为危重患者死亡的主要原因之一。临床上由细菌感染引发的脓毒症占到了95%以上,而细菌感染引起的内毒素脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)的释放是导致脓毒症的主要因素。当LPS入侵机体时,首先发挥作用的便是单核-巨噬细胞系统,巨噬细胞表面的Toll样受体4识别LPS并激活巨噬细胞胞内信号传导,产生大量的促炎性细胞因子,如TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12等,细胞因子通过血液循环或旁分泌到达远端靶器官或靶细胞并发挥生物学效应,引起全身炎症反应,导致脓毒症的发生。鉴于巨噬细胞在LPS诱发的脓毒症的发生发展中发挥着关键性的始动作用,因此,寻找并鉴定新的巨噬细胞炎症反应的调控分子对于全面认识了解脓毒症具有重要的意义。蛋白4.1R是蛋白4.1家族的成员,此家族还包括蛋白4.1B、蛋白4.1N、蛋白4.1G。蛋白4.1家族的成员拥有4个保守的结构域:FERM结构域,FERM相邻的调节结构域、血影蛋白-肌动蛋白结合结构域和C-末端结构域。蛋白4.1R作为膜骨架蛋白,衔接多种跨膜蛋白与细胞骨架蛋白,...

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
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第一章 前言
    1.1 脓毒症
    1.2 脓毒症与促炎细胞因子
    1.3 脓毒症与巨噬细胞
    1.4 蛋白4.1R
    1.5 研究目的与意义
    1.6 研究内容与方法
        1.6.1 4.1 R对LPS诱导的脓毒症的影响
        1.6.2 4.1 R对LPS诱导的脓毒症小鼠肝损伤的影响
        1.6.3 C57BL/6小鼠骨髓来源巨噬细胞中4.1R表达的鉴定
        1.6.4 4.1 R对LPS诱导巨噬细胞炎症反应的调控作用
    1.7 技术路线
第二章 4.1R对LPS诱导的脓毒症的影响
    2.1 材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 主要药品与试剂
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 常用试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 小鼠脓毒症模型的建立
        2.2.2 小鼠血清的制备
        2.2.3 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中细胞因子的表达量
        2.2.4 数据分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 4.1 R对脓毒症小鼠生存期的影响
        2.3.2 4.1 R对脓毒症小鼠血清中促炎性细胞因子及趋化因子分泌的影响
    2.4 讨论
第三章 4.1R对脓毒症小鼠肝损伤的影响
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 主要药品与试剂
        3.1.3 主要仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 肝组织石蜡包埋、切片与H&E染色
        3.2.2 荧光定量PCR检测脓毒症小鼠肝组织中促炎性细胞因子的表达
        3.2.3 肝组织巨噬细胞免疫组化
        3.2.4 数据分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 4.1 R对脓毒症小鼠肝组织损伤的影响
        3.3.2 4.1 R对脓毒症小鼠肝组织促炎细胞因子及趋化因子表达的影响
        3.3.3 4.1 R对脓毒症小鼠肝组织中巨噬细胞浸润的影响
    3.4 讨论
第四章 C57BL/6小鼠骨髓来源巨噬细胞中4.1R表达鉴定
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验动物
        4.1.2 主要药品与试剂
        4.1.3 实验仪器
        4.1.4 常用试剂的配制
    4.2 实验方法
        4.2.1 小鼠骨髓来源的巨噬细胞的定向诱导
        4.2.2 流式检测诱导的BMDM的纯度
        4.2.3 BMDM中4.1R基因水平表达的鉴定
        4.2.4 BMDM中4.1R蛋白水平表达的鉴定
        4.2.5 BMDM中4.1R基因外显子图谱的绘制
    4.3 实验结果
        4.3.1 C57BL/6小鼠骨髓来源的巨噬细胞的纯度鉴定
        4.3.2 4.1 R+/+BMDM和4.1R-/-BMDM细胞中4.1R表达的鉴定
        4.3.3 C57BL/6小鼠BMDM细胞中4.1R基因的外显子图谱的绘制
    4.4 讨论
第五章 4.1R对LPS诱导巨噬细胞炎症反应的调控作用
    5.1 实验材料
        5.1.1 实验动物
        5.1.2 主要药品与试剂
        5.1.3 主要仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 蛋白4.1R对巨噬细胞产生促炎性细胞因子及趋化因子的影响
        5.2.2 Western Blotting印记检测巨噬细胞中MAPKs通路的活化
        5.2.3 数据分析
    5.3 实验结果
        5.3.1 4.1 R对LPS刺激巨噬细胞后产生促炎细胞因子及趋化因子的影响
        5.3.2 4.1 R对巨噬细胞中MAPKs信号通路的影响
    5.4 讨论
第六章 全文讨论
参考文献
个人简历、硕士期间发表的学术论文与研究成果
致谢



本文编号：3771189