DNA甲基转移酶及葡萄糖的荧光传感新方法

发布时间：2023-05-10 05:18

　　甲基转移酶催化的DNA甲基化反应是非常重要的表观遗传修饰过程,在改变DNA的构象、染色质的结构,基因表达等生物过程中起着非常关键的调节作用。DNA甲基转移酶活性和甲基化水平的异常会导致多种疾病的发生,DNA甲基转移酶也因而成为医学诊断及治疗一些复杂疾病的重要靶标。因此,开发建立操作简单、灵敏度高的DNA甲基转移酶活性的检测方法不仅在表观遗传等基本生物过程的研究而且在相关疾病诊断、药物开发研究等方面具有重要意义。此外,葡萄糖是糖尿病诊断的一项重要生化指标。研究建立操作简单、灵敏度高、价格低廉的葡萄糖定量检测方法,对于糖尿病的治疗和控制十分必要。本论文中,我们基于一些简单、高效的核酸扩增技术,以及性能优异的Ce02纳米材料,发展了分别针对甲基转移酶及葡萄糖两类物质的新型荧光传感方法。主要内容如下:1、论文第二章,我们基于末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的核酸扩增技术建立了一种新型的检测DNA甲基转移酶活性的新方法。在本方法中,只需要设计一种简单的茎环结构DNA分子,其茎部含有Dam甲基转移酶特殊识别5’-G-A-T-C-3’序列,且3’末端被磷酸封闭。当Dam甲基转移酶作用于该茎环DNA...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 选题背景与意义
    1.2 甲基转移酶检测技术研究进展
        1.2.1 传统的检测方法
        1.2.2 基于功能核酸探针的检测方法
    1.3 葡萄糖检测技术研究进展
    1.4 本论文选题思想和主要研究内容
        1.4.1 基于核酸末端延伸反应的甲基转移酶的活性分析
        1.4.2 基于CeO₂的荧光传感体系
第二章 基于核酸末端延伸反应的蛋白酶活性分析
    2.1 前言
    2.2 实验部分
        2.2.1 仪器与试剂
        2.2.2 Dam甲基转移酶的活性检测的实验步骤
        2.2.3 T4多聚核苷酸磷酸激酶的活性检测的实验步骤
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 基于核酸末端延伸反应的Dam甲基转移酶的活性检测原理
        2.3.2 优化TdT酶和DpnI酶的用量
        2.3.3 基于核酸末端延伸反应的Dam甲基转移酶活性分析
        2.3.4 基于核酸末端延伸反应的Dam甲基转移酶抑制剂实验
        2.3.5 基于核酸末端延伸反应的T4多聚核苷酸激酶的活性检测原理
        2.3.6 优化Tris-HCl、TdT缓冲溶液、TdT酶的浓度
        2.3.7 基于核酸末端延伸反应的T4多聚核苷酸激酶活性分析
    2.4 本章小结
第三章 基于CeO₂纳米粒子的葡萄糖荧光检测
    3.1 前言
    3.2 实验部分
        3.2.1 仪器与试剂
        3.2.2 基于Ce³⁺/钙黄绿素的体系检测H₂O₂的实验过程
        3.2.3 基于CeO₂/钙黄绿素的体系检测H₂O₂和葡萄糖的的实验过程
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 检测原理
        3.3.2 基于Ce³⁺/钙黄绿素体系检测H₂O₂活性分析
        3.3.3 基于CeO₂/钙黄绿素体系的活性分析
    3.4 本章小结
结语
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间科研成果



本文编号：3813111