咪唑克生对脓毒症小鼠的生存保护作用及其抗炎效应的研究
发布时间：2017-05-21 21:21
本文关键词：咪唑克生对脓毒症小鼠的生存保护作用及其抗炎效应的研究，，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的探讨咪唑克生对脓毒症小鼠的生存保护作用及其抗炎效应与抗炎机制。方法⑴将C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组(生理盐水)、模型组(腹腔注射无菌LPS,40mg/kg)、治疗组(IDA 1mg/kg+LPS 40mg/kg),分别观察各组小鼠生存状况并及时记录死亡时间。⑵将C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、模型组、IDA低/中/高治疗组,对照组腹腔注射同等体积的生理盐水,模型组腹腔注射LPS 10mg/kg,IDA治疗组分别注射LPS 10mg/kg和不同剂量的IDA(0.3、1、3mg/kg)。在制模6h后分别收集各组小鼠血清,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎症因子TNF-α、IL-6的水平;制模24小时后,各组分别收集血清及肝组织,用全自动生化分析仪检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)乳酸脱氢酶(LDH)的含量,用ELISA检测肝组织炎症因子的水平。⑶以原代腹腔巨噬细胞和RAW264.7细胞为工具细胞,LPS为诱导剂构建体外细胞炎症模型,对照组不做任何处理,LPS组加入10μg/ml LPS,IDA组加入10μg/ml LPS和不同剂量的IDA(5、25、100μM),细胞置于37℃,5%CO2培养箱中培养。细胞加药刺激24h后收集上清,采用ELISA法检测炎症因子TNF-α、IL-6、MCP-1的含量,硝酸还原酶法检测NO的含量;分别于LPS作用2h、4h收集细胞,检测炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA水平;于药物作用1h,LPS作用不同时间点检测细胞核内NF-κB的表达。结果⑴生理盐水对照组小鼠活动正常,状态良好,生存率为100%;模型组小鼠在造模4h后陆续出现死亡,96h生存率仅为16.7%,与对照组相比有统计学差异(P=0.001);腹腔注射咪唑克生干预后明显提高小鼠生存率(41.7%比16.7%,P0.05)。⑵lps攻击6h后,小鼠血清tnf-α、il-6水平均较对照组显著升高[tnf-α(ng/l):403.96±40.98比17.50±8.68;il-6(ng/l):61400.31±7826.61比2436.30±448.89;均p㩳0.001],咪唑克生能剂量依赖性的抑制炎症因子的升高[tnf-α(ng/l):低剂量组379.67±52.32比403.96±40.98(p=0.407),中剂量组273.17±24.77比403.96±40.98(p=0.001),高剂量组170.09±28.53比403.96±40.98(p㩳0.001);il-6(ng/l):低剂量组45516.55±5422.18比2436.30±448.89(p=0.001),中剂量组30705.32±1785.33比2436.30±448.89(p㩳0.001),高剂量组16570.81±1083.65比2436.30±448.89(p㩳0.001)]。咪唑克生能有效抑制lps攻击小鼠血清转氨酶的异常升高:[ast(u/l):255.14±11.24比455.89±40.87;alt(u/l):53.62±5.02比85.51±5.10;ldh(u/l):700.33±53.47比2184.03±107.22,均p㩳0.01]。同时,咪唑克生还可以降低肝组织的炎症因子水平:[tnf-α(pg/mg):2353.44±367.03比3670.87±258.27(p㩳0.01);il-6(ng/l):3526.60±167.16比4618.79±352.94(p㩳0.01)]。⑶lps能刺激腹腔巨噬细胞炎症因子tnf-α(ng/l,7259.14±320.70比28.50±27.08,p㩳0.001)、il-6(ng/l,14809.60±5852.73比1113.47±465.53,p=0.001)、mcp-1(ng/l,20847.37±1788.33比447.37±395.69,p㩳0.001)及no(μmol/l,1900±144.31比603.03±102.18,p㩳0.001)分泌增加,咪唑克生能抑制巨噬细胞tnf-α(ng/l,低剂量组4695.92±435.51比7259.14±320.70,p㩳0.001;中剂量组3999.66±316.05比7259.14±320.70,p㩳0.001;高剂量组784.4±281.90比7259.14±320.70,p㩳0.001)、il-6(ng/l,低剂量组12400.64±5270.22比14809.60±5852.73,p=0.451;中剂量组5522.79±2492.45比14809.60±5852.73,p㩳0.013;高剂量组1802.96±1534.18比14809.60±5852.73,p=0.002)、mcp-1(ng/l,低剂量组19457.90±1126.71比20847.37±1788.33,p=0.214;中剂量组11373.68±1110.21比20847.37±1788.33,p㩳0.001;高剂量组2005.26±1534.28比20847.37±1788.33,p㩳0.001)和no(μmol/l,低剂量组1739.40±100.14比1900±144.31,p=0.188;中剂量组1390.91±181.60比1900±144.31,p=0.001;高剂量组654.54±150.21比1900±144.31,p㩳0.001)的分泌,且抑制程度与咪唑克生的浓度相关。⑷咪唑克生能抑制RAW 264.7细胞炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA的升高。此外,咪唑克生使巨噬细胞NF-κBp65入核提前至15min且表达明显增加(18.70±2.29比1.09±0.36,P0.05),但可以减少NF-κBp50核内的表达,45min时差异显著(2.94±0.54比1.99±0.14,P0.05)。结论在本实验中,咪唑克生表现出对脓毒症小鼠的生存保护作用,提高脓毒症小鼠的存活时间和生存率。此外,咪唑克生还能显著减轻内毒素攻击小鼠全身炎症反应和抑制巨噬细胞炎症因子和炎症介质的分泌,且呈剂量依赖性。在一定范围内,低浓度的IDA(5μmol/L)就表现出一定的抑制效应,高浓度(100μmol/L)抗炎效应最明显,其抗炎作用可能与NF-κB信号途径有关。
【关键词】：脓毒症 炎症 巨噬细胞 作用机制
【学位授予单位】：成都医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R459.7
【目录】：
- 摘要6-9
- Abstract9-12
- 前言12-15
- 第一部分 咪唑克生对脓毒症小鼠的生存保护作用15-18
- 1 引言15
- 2 材料与方法15-16
- 2.1 材料15-16
- 2.2 方法16
- 3 结果16-17
- 3.1 LPS对小鼠生存的影响16
- 3.2 咪唑克生对脓毒症小鼠的保护作用16-17
- 4 讨论17
- 5 结论17-18
- 第二部分 咪唑克生对内毒素攻击小鼠及活化的巨噬细胞抗炎效应的研究18-28
- 1 引言18
- 2 材料与方法18-23
- 2.1 材料18-19
- 2.2 方法19-23
- 3 实验结果23-25
- 3.1 动物及细胞一般情况23-24
- 3.2 咪唑克生对内毒素攻击小鼠血清炎症因子TNF-α、IL-6 水平的影响24
- 3.3 咪唑克生对内毒素攻击小鼠血清AST、ALT、LDH的影响24
- 3.4 咪唑克生对内毒素攻击小鼠肝组织炎症因子TNF-α、IL-6 的影响24
- 3.5 LPS及咪唑克生对巨噬细胞活力的影响24-25
- 3.6 不同剂量咪唑克生对细胞炎症因子水平及NO含量的影响25
- 4 讨论25-26
- 5 结论26-28
- 第三部分 咪唑克生抗炎机制的研究28-41
- 1 引言28
- 2 材料与方法28-36
- 2.1 材料28-30
- 2.2 方法30-36
- 3 结果36-39
- 3.1 咪唑克生对LPS活化的RAW264.7 细胞炎症因子蛋白水平的影响36-37
- 3.2 咪唑克生对LPS活化的RAW264.7 细胞炎症因子mRNA的影响37-39
- 3.3 咪唑克生对LPS活化的腹腔巨噬细胞NF-κB的影响39
- 4 讨论39-40
- 5 结论40-41
- 全文结论41-42
- 参考文献42-45
- 文献综述45-58
- 参考文献53-58
- 附录58-60
- 致谢60
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 潘伟男;邓水秀;;咪唑啉受体及其激动剂和拮抗剂的研究进展[J];实用药物与临床;2015年05期
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3 李青文;王焱林;张宗泽;何祥虎;陈凯;姚星;;血红素加氧酶-1蛋白转导对脓毒症大鼠肠损伤的影响[J];中华麻醉学杂志;2014年11期
4 张璐瑶;聂W
本文编号：384892
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