探针熔解曲线分析用于染色体微缺失/微重复检测的研究

发布时间：2023-10-21 09:11

　　染色体微缺失和微重复与许多疾病的发生有关,22ql1.2微缺失综合征、22q1 1.2微重复综合征以及7q1 1.23微缺失综合征和7q1 1.23微重复综合征均属于较常见的染色体遗传病。这类疾病患者的临床表型复杂多样,危及到人体多个器官的正常发育,且预后不良,因此早期筛查和诊断极为重要。实时荧光定量PCR技术作为重要的检测手段,已经广泛地应用于基因突变、基因拷贝数变异等的检测,具有检测时间短、灵敏度高、特异性好、闭管操作无污染、自动化程度高等优势。本课题利用实时荧光定量PCR技术结合DNA序列相似性原理,检测上述常见的4种染色体微缺失和微重复。荧光探针可与靶序列和内参序列特异性结合,随后发生熔解产生具有不同Tm值(DNA熔解温度)的产物峰,可根据专业软件给出的峰高值(Rm)计算靶序列与参考序列的Rm比值(Ratio值),以实现对待测基因拷贝数的相对定量。因参考序列与检测靶序列具有高度相似性,设计一对引物即可实现对靶序列和相似序列的同步扩增,保证了 PCR扩增效率的一致性。最后,通过将多个检测片段得到的Ratio值进行归一化处理后求平均,即为待测标本的相对拷贝数。本课题针对22q1 1...

【文章页数】：91 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    第一节 实时定量PCR技术概述
    第二节 染色体亚微观变异及其发生机制概述
    第三节 论文的提出和创新点
    参考文献
第二章 探针熔解曲线分析用于22q11.2DS及22q11.2微重复综合征检测的研究
    第一节 引言
        1.1 22q11.2 DS、22q11.2微重复综合征概述
        1.2 22q11.2 DS、22q11.2微重复综合征的分子遗传学机制
        1.3 22q11.2 DS、22q11.2微重复综合征热点基因研究
        1.4 22q11.2 DS、22q11.2微重复综合征临床表现型
        1.5 22q11.2 DS、22q11.2微重复综合征现有诊断技术
            1.5.1 荧光原位杂交法
            1.5.2 多重连接探针扩增技术
            1.5.3 实时定量PCR
            1.5.4 多重PCR
            1.5.5 比较基因组杂交
        1.6 22q11.2 DS、22q11.2微重复综合征的治疗
    第二节 材料与方法
        2.1 相似序列查找及筛选
        2.2 探针、引物设计
        2.3 质粒标准品的构建和制备
        2.4 基因组DNA样本的收集和提取
        2.5 SS-MCA体系优化与建立
        2.6 多片段稳定性比较和筛选
        2.7 人工质粒标准品考察
        2.8 体系最低检测限的考察
        2.9 体系重复性考察
        2.10 标本检测
    第三节 实验结果与分析
        3.1 多片段稳定性比较和筛选
        3.2 人工质粒标准品考察
        3.3 体系最低检测限考察
        3.4 体系重复性考察
        3.5 标本检测
    第四节 讨论
    参考文献
第三章 探针熔解曲线分析用于7q11.23微缺失综合征和7q11.23微重复综合征检测的研究
    第一节 引言
        1.1 7q11.23微缺失综合征、7q11.23微重复综合征概述
        1.2 7q11.23微缺失综合征、7q11.23微重复综合征的分子生物学机制
        1.3 7q11.23微缺失综合征、7q11.23微重复综合征的基因研究
        1.4 7q11.23微缺失综合征、7q11.23微重复综合征的临床表型
            1.4.1 语言、认和与行为能力
            1.4.2 面部特征
            1.4.3 心血管和结缔组织异常
            1.4.4 生长和内分泌问题
            1.4.5 神经问题
            1.4.6 其他表型
        1.5 临床诊断评分系统
        1.6 诊断方法
    第二节 材料与方法
        2.1 相似序列查找及筛选
        2.2 引物和探针的设计
        2.3 质粒标准品的构建和制备
        2.4 基因组DNA样本的收集和提取
        2.5 SS-MCA体系优化与建立
        2.6 多片段稳定性比较和筛选
        2.7 人工质粒标准品考察
        2.8 体系最低检测限考察
        2.9 体系重复性考察
        2.10 标本检测
    第三节 实验结果与分析
        3.1 多片段稳定性比较和筛选
        3.2 人工质粒标准品考察
        3.3 体系最低检测限考察
        3.4 体系重复性考察
        3.5 标本检测
    第四节 讨论
    参考文献
英文缩写索引
致谢



本文编号：3855553