PCR-核酸飞行时间质谱系统检测新型冠状病毒方法的建立及应用研究

发布时间：2024-04-14 10:05

　　背景新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在全球暴发,实验室检测结果是疾病诊断的重要依据,检测方法的灵敏度和特异度是影响实验结果的关键因素,现实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)核酸检测方法是COVID-19确诊的通用方法,但其检测灵敏度有方法局限性,依赖标本病毒含量。通过对PCR-核酸飞行时间质谱检测方法的优化,从而提高对低新型冠状病毒(SARS-CoV-2)含量病例检测的灵敏度,可为现有方法做有效补充。目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)原理,在Clin-ToFⅡ飞行时间质谱系统上,建立PCR-核酸飞行时间质谱(PCR-TOF MS)系统检测SARS-CoV-2的方法,并评估其实际应用价值。方法 2020年2—3月于上海市临床检验中心室间质评阳性样本40份、阴性样本7份,国家卫生健康委员会室间质评阳性样本41份、阴性样本33份,本实验室购买阳性质粒及稀释样本32份,健康人样本28份,空白对照超纯水5份,共186份样本作为建立PCR-TOF MS系统数据。于2020年1—2月收集安徽省内临床送检到安徽省疾病预防控制中心的疑似COVID-19患者上呼吸道样本...

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

图1典型阳性样本质谱图

当以任一基因的检出作为评判标准时，接收者操作特征曲线（ROC曲线）下面积趋近于1，计算出的最佳门限值为5.5,SNR=3通常被认为是质谱峰定性检出的标准。由此，SNR≥6时为阳性判定标准，SNR在3～6时判定为疑似阳性，所有基因的SNR<3时判定为阴性。以ORF1ab基因和N基因....

图2N基因和ORF1ab基因不同SNR阈值下SARS-CoV-2检出灵敏度和错误率

图1典型阳性样本质谱图2.1.2PCR-TOFMS模版条件优化

图3样本质谱图

对80份疑似样本及20份健康人群样本的检测结果分析显示：PCR-TOFMS检测出的阳性样本数为72份，阳性检出率为90.00%；而实时荧光定量PCR法检测出的阳性样本为60份，阳性检出率为75.00%；但实时荧光定量PCR法存在25.00%(20/80）的可疑结果；PCR-TO....

本文编号：3954514