生物玻璃/双亲性壳聚糖复合物介导成骨生长肽基因转染的研究

发布时间：2025-02-10 18:49

　　基因治疗已经开始应用于获得性或者是原发性疾病的诊断治疗中。基因转染是关键步骤,而转染载体的研究成为研究的热点。本文采用生物玻璃和双亲性壳聚糖的复合物作为研究对象,来探究其在基因转染的作用及其机理。本文制备出生物玻璃,其粒径通过SEM和Zeta电位仪测得在100-150 nm范围内,通过TEM观察形貌,其类似于海胆形状,内部具有丰富的纳米孔径结构。另外,对单纯的壳聚糖进行修饰使得其在水溶液中的溶解性能提高。通过在壳聚糖的侧链位置引入亲水性链段mPEG和疏水链段PCL,使得其成为双亲性壳聚糖。通过UV表征,双亲性壳聚糖显示出了特有的峰位,测得CMC值;通过GPC测得双亲性壳聚糖的数均分子量和重均分子量;通过FT-IR和NMR对其化学结构进行了表征,结果显示成功接枝上两链段。通过基因重组技术,成功构建了重组质粒-成骨生长肽质粒pOGP。该质粒能够表达成骨生长肽和绿色荧光蛋白。其质粒上还含有启动子,终止子,抗抗生素(Kana霉素)序列等。质粒的构建载体为PAcGFP1-N1,大小在4726 bp。将生物玻璃和双亲性壳聚糖以合适的比例与pOGP质粒复合,然后深入研究转染及其机理。首先,研究了生物玻...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1基因治疗的流程

图1-1基因治疗的流程Fig.1-1Theprocessofgenetherapy腺病毒及慢病毒等，这类载体一般转染效率较高，但是存在着生NA有可能整合到宿主细胞内，生物潜在毒性较大[18-22]。另一类载体有脂质体、壳聚糖、聚乙烯亚胺、二氧化硅、钙磷体系等低免....

图1-2壳聚糖的转染路径Fig.1-2Thetransfectionpathwayofchitosan

第一章绪论达细胞膜时，刺激膜外蛋白，内陷形成囊泡，将脂质体包裹进入细胞内部，在细胞内部由于脂质体与内吞膜上的磷脂发生作用，囊泡溶解，遗传物质释放从而有机会进入细胞核实现转染。阳离子脂质体在进入血液后，尤其是遇见血清后，容易团聚，或是被降解。所以一般要对脂质体进行修饰，提高在体内....

图1-3碳纳米管转染各类遗传物质Fig.1-3Thegenetransfectionofcarbonnanotubes

壳聚糖是一类常见的转染载体（图1-2），而壳寡糖是壳聚糖部分降解的产物[31-34]，是分子量较小的物质。壳聚糖由于存在大量的氨基，所以成为潜在的转染载体但是同时它也存在大量的羟基基团。这些基团使得分子间氢键作用增加，水溶性大大降低，从而影响了转染性能。在酸性溶液中，壳聚糖的质....

图1-4熔融法生物玻璃45S5Fig.1-4ThetraditionalBioactiveglass45S5

现磷酸钙具有转染进入KB细胞的能力。现在研究者趋向于研究尺寸可控染DNA的能力。如将聚乙二醇-聚天冬氨酸共聚物与磷酸钙复合形成纳米径可控，转染效率较高，细胞毒性较低的优点。的纳米金适用范围较广泛。用于cRNA，mRNA,DNA的转染实验中。Schm55作为较为理想....

本文编号：4032915