离子色谱法测定人体体液中酪氨酸及其代谢产物

发布时间：2017-06-26 16:10

  本文关键词：离子色谱法测定人体体液中酪氨酸及其代谢产物，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：酪氨酸是组成蛋白质的重要氨基酸,据国内外文献报道,人体体液中酪氨酸及其代谢物含量的变化与某些疾病有关联。因此,研究建立一种简便、快速、灵敏的分析方法并且应用于人体体液中酪氨酸及其代谢物含量的检测,对于一些疾病的诊断、监测和治疗具有十分重要的临床意义。本文采用离子色谱分离结合不同的检测器,构建了人体血清和尿液中酪氨酸及其代谢产物分析新方法,并应用于实际样品检测,取得了较好的效果。主要研究成果如下:1.建立了阴离子交换色谱-积分脉冲安培法(AEC-IPAD)测定人体血清中对羟苯基乳酸的分析新方法。血样经乙腈处理沉淀蛋白,离心后取上清液氮气吹干,用流动相溶解残渣并定容到相应的刻度,混匀后进样检测。采用IonPac AG18保护柱(50 mm×2 mm)和IonPac AS18分析柱(250 mm×2 mm),以0.023 mol/L NaOH溶液为淋洗液,流速为0.25 mL/min,在优化的安培检测波形条件下,对羟苯基乳酸在0.03~2 mg/L浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数0.9999,检出限(S/N=3)为0.010 mg/L。三个水平的加标回收率在92.0%~102%之间,相对标准偏差在2.78%~3.79%之间。此方法准确可靠,可用于实际样品的检测。2.建立了阴离子交换色谱-荧光法(AEC-FLD)同时测定人体血清中的酪氨酸(Tyr)、对羟苯基乳酸(PHPLA)和对羟苯基丙酸(PHPA)的分析新方法。样品经乙腈处理沉淀蛋白,离心后取上清液直接进样检测。采用0.004 mol/L NaOH溶液作为淋洗液,流速为0.45 mL/min,三种物质在IonPac AG21保护柱(50mm×2 mm)和IonPac AS21分析柱(250 mm×2 mm)上能得到良好的分离,荧光检测器的激发波长和发射波长分别为277 nm和340 nm。Tyr、PHPLA和PHPA的线性范围分别为0.30~25 mg/L、0.025~2 mg/L和0.025~2 mg/L,相关系数在0.9998~0.9999之间,检出限(S/N=3)分别为0.024 mg/L、0.020 mg/L和0.019 mg/L。三个水平的加标回收率在72.6%~99.1%之间,其相对标准偏差均小于6.62%。该方法具有简单、快速、准确、二次污染小等特点,应用于实际样品的测定,结果令人满意。3.建立了阴离子交换色谱-荧光法(AEC-FLD)测定人体尿样中的对羟苯基乳酸(PHPLA)的分析新方法。尿液经ENVI-18固相萃取小柱,5 mL 0.003 mol/L NaOH溶液洗脱目标物后,洗脱液中加入壳聚糖材料进行浓缩,1 mL 0.1 mol/L Na2CO3溶液洗脱目标分析物后直接进样检测。采用0.003 mol/L Na2CO3溶液作为淋洗液,流速为0.45 mL/min,物质在IonPac AG21保护柱(50 mm×2 mm)和IonPac AS21分析柱(250 mm×2 mm)峰形较好,荧光检测器的激发波长和发射波长分别为277 nm和340 nm。PHPLA的线性范围为0.05~10 mg/L,相关系数为0.9965,检出限(S/N=3)为0.016 mg/L。三个水平的加标回收实验中,健康人和乳腺癌患者尿样的加标回收率分别在98.5%~105%和86.5%~95.0%之间,相对标准偏差分别在1.66%~4.12%和0.81%~3.36%之间。该方法已用于实际尿样中对羟苯基乳酸的分析检测。
【关键词】：离子交换色谱-积分脉冲安培法 离子交换色谱-荧光检测法 人体体液 酪氨酸及其代谢产物 壳聚糖材料
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R446.1;O657.7
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一章 绪论9-23
• 1.1 酪氨酸及其代谢产物的研究进展9-15
• 1.1.1 酪氨酸及其代谢产物概述9-10
• 1.1.2 酪氨酸及其代谢产物分析研究进展10-14
• 1.1.3 酪氨酸及其代谢产物与疾病相关性研究14-15
• 1.2 乳腺癌的研究状况15-16
• 1.3 本文研究的主要内容16-17
• 参考文献17-23
• 第二章 阴离子交换色谱-积分安培法测定人体血清中的对羟苯基乳酸23-32
• 2.1 引言23
• 2.2 实验部分23-25
• 2.2.1 仪器与试剂23-24
• 2.2.2 标准溶液的配制24
• 2.2.3 血清样本的采集与处理24
• 2.2.4 色谱分析条件24-25
• 2.3 结果与讨论25-29
• 2.3.1 淋洗液浓度的选择25
• 2.3.2 检测波形的优化25-27
• 2.3.3 样品前处理条件的选择27
• 2.3.4 干扰试验27-28
• 2.3.5 线性方程、线性范围和检出限28
• 2.3.6 回收率实验28
• 2.3.7 样品测定28-29
• 2.4 结论29-30
• 参考文献30-32
• 第三章 阴离子交换色谱-荧光法测定人体血清中的酪氨酸及其代谢产物32-42
• 3.1 引言32
• 3.2 实验部分32-34
• 3.2.1 仪器与试剂32-33
• 3.2.2 标准溶液的配制33
• 3.2.3 血清样本的采集与处理33
• 3.2.4 色谱分析条件33-34
• 3.3 结果与讨论34-40
• 3.3.1 色谱分离条件的选择34-35
• 3.3.2 荧光波长的选择35-36
• 3.3.3 样品前处理条件的选择36
• 3.3.4 干扰实验36
• 3.3.5 线性方程、线性范围和检出限36-37
• 3.3.6 回收率实验37-38
• 3.3.7 样品测定38-40
• 3.4 结论40-41
• 参考文献41-42
• 第四章 阴离子交换色谱-荧光法测定人体尿样中的对羟苯基乳酸42-55
• 4.1 引言42
• 4.2 实验部分42-44
• 4.2.1 仪器与试剂42-43
• 4.2.2 标准溶液的配制43
• 4.2.3 尿液样本的采集与处理43
• 4.2.4 色谱分析条件43
• 4.2.5 壳聚糖磁性材料的制备43-44
• 4.3 结果与讨论44-52
• 4.3.1 材料的表征44-45
• 4.3.2 色谱分离条件的优化45
• 4.3.3 样品前处理条件的优化45-49
• 4.3.4 干扰实验49
• 4.3.5 线性方程、线性范围和检出限49
• 4.3.6 方法的精密度和准确度49-51
• 4.3.7 样品测定51-52
• 4.4 结论52-53
• 参考文献53-55
• 第五章 小结55-56
• 致谢56-57
• 攻读硕士学位期间的研究成果57

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