动力相关蛋白1（Drp1）激活对脓毒症心肌细胞转化为促炎症状态的影响

发布时间：2017-06-28 11:12

  本文关键词：动力相关蛋白1（Drp1）激活对脓毒症心肌细胞转化为促炎症状态的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景:脓毒症(Sepsis)是机体对严重感染的全身性过度炎症反应综合征(Systemic Inflammatory Response Syndrome,SIRS)所导致的可以威胁生命的多脏器功能不全综合征(Multiple Organ Dysfunction Syndrome,MODS),已成为临床主要死亡原因之一。脓毒症时会发生心功能不全,其原因之一是心肌细胞转化为促炎症状态。动力相关蛋白1(Dynamin-related protein 1,Drp1)是一种介导线粒体分裂的蛋白,目前未见关于Drp1在脓毒症中对心肌细胞转化为促炎症状态影响的相关研究。目的:探索动力相关蛋白1在脓毒症心肌细胞转化为促炎症状态中的作用。方法:动物研究:取12只3-4月龄SD大鼠(雌雄不拘),随机分为3组。以3g/kg的剂量向大鼠腹腔注射大鼠盲肠内容物(180 mg/m L)制备脓毒症模型;对照组大鼠腹腔注射(i.p.)生理盐水;抑制剂组接受线粒体分裂抑制剂(Mdivi-1,25 mg/kg,i.p.)预处理1 h后腹腔注射盲肠内容物。6 h后观察大鼠心肌组织切片白细胞浸润程度并采用酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)测定心肌组织髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)活性。并收集对照组、脓毒症大鼠血浆用于刺激心肌细胞。细胞研究:使用脓毒症及对照组血浆刺激相应组乳鼠心肌细胞,抑制剂组则先接受Mdivi-1(10μmol/L)预处理1h后接受脓毒症大鼠血浆刺激。分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real Time Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)和酶联免疫吸附法分别检测脂多糖诱导趋化因子(LPS-induced CXC Chemokine,LIX)以及角质细胞起源趋化因子(Keratinocyte-derived Chemokine,KC)m RNA及蛋白的表达与释放。免疫蛋白印迹法(Western Blotting,WB)检测脓毒症大鼠血浆刺激后Drp1在丝氨酸637(Serine 637)位点的去磷酸化程度及其向线粒体的迁移情况。结果:研究显示脓毒症大鼠心肌间质白细胞较对照组浸润增加且MPO活性显著升高(P0.05);Drp1抑制剂(Mdivi-1,25mg/kg)预处理可显著减少脓毒症大鼠心肌间质白细胞浸润程度(P0.05)并明显降低MPO活性(P0.05)。脓毒症血浆刺激心肌细胞引起趋化因子(LIX、KC)较对照组表达、释放增加(P0.05)。Mdivi-1(10μmol/L)预处理心肌细胞可显著抑制脓毒症大鼠血浆刺激的心肌细胞趋化因子表达及释放(P0.05)。脓毒症大鼠血浆刺激心肌细胞可导致Drp1于S637位点显著去磷酸化(P0.05),以及Drp1由胞质迁移至线粒体(P0.05),而Mdivi-1(10μmol/L)预处理可抑制Drp1在S637位点的去磷酸化(P0.05),以及Drp1由胞质至线粒体的迁移(P0.05)。结论:脓毒症时Drp1激活后由胞质迁移至线粒体在心肌细胞转化为促炎症状态过程中起着关键作用。
【关键词】：脓毒症 心肌细胞 动力相关蛋白1
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R459.7
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 英文缩写及符号索引一览表11-12
• 引言12-17
• 参考文献14-17
• 第一部分 抑制动力相关蛋白 1（Drp1）对脓毒症大鼠心肌炎症反应的影响17-24
• 1 材料及方法17-21
• 1.1 实验动物17
• 1.2 主要试剂与仪器17-18
• 1.3 实验方法18-21
• 1.4 统计学分析21
• 2 结果21-22
• 2.1 抑制Drp1对脓毒症所致心肌间质白细胞浸润增加的影响21
• 2.2 抑制Drp1对脓毒症所致心肌炎症反应的影响21-22
• 3 讨论22-23
• 4 结论23-24
• 第二部分 抑制动力相关蛋白 1（Drp1）对脓毒症血浆刺激心肌细胞趋化因子表达及释放影响的测定24-38
• 1 材料及方法24-32
• 1.1 实验动物24
• 1.2 主要试剂与仪器24-26
• 1.3 实验方法26-32
• 1.4 统计学分析32
• 2 结果32-35
• 2.1 脓毒症血浆刺激对心肌细胞趋化因子各时间点m RNA表达及蛋白释放的影响32-34
• 2.2 抑制Drp1对脓毒症血浆引起的心肌细胞转化为促炎症状态的影响34-35
• 3 讨论35-37
• 4 结论37-38
• 第三部分 脓毒症血浆刺激对心肌细胞动力相关蛋白（Drp1）在S637位点去磷酸化及其向线粒体迁移影响的测定38-49
• 1 材料及方法38-44
• 1.1 实验动物38
• 1.2 主要试剂与仪器38-41
• 1.3 实验方法41-44
• 1.4 统计学分析44
• 2 结果44-47
• 2.1 脓毒症血浆刺激时间对心肌细胞Drp1在S637位点去磷酸化的影响44-45
• 2.2 Mdivi-1 预处理对脓毒症血浆刺激的心肌细胞Drp1在S637位点去磷酸化的影响45-46
• 2.3 脓毒症血浆刺激对心肌细胞Drp1由胞质迁移至线粒体的影响46-47
• 3 讨论47-48
• 4 结论48-49
• 总结49-51
• 参考文献51-56
• 综述56-70
• 参考文献63-70
• 攻读硕士学位期间发表的文章70-71
• 致谢71

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