基于层析试纸条和纳米颗粒对破伤风抗体进行测定的研究

发布时间：2017-06-29 03:10

  本文关键词：基于层析试纸条和纳米颗粒对破伤风抗体进行测定的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：破伤风是由高致病性的破伤风杆菌所释放的毒素造成的,由于破伤风外毒素直接破坏人体的神经肌肉组织,故而发病后症状都比较严重,同时死亡率也比较高。因此,快速、准确地监测人体血清中的破伤风抗体水平,对于破伤风的预防和治疗起着重要的指导作用。免疫层析试纸条技术应用于破伤风抗体的检测,具有简便快速、样品需求量少、对实验设备要求低、可用于床边诊断等优势,在临床分析和医学诊断等领域有很好的发展前景。本文针对破伤风抗体的测定,发展了两种检测方法,一种是基于双抗原夹心法原理的胶体金试纸条,另一种是基于量子点的荧光试纸条。具体开展的工作如下:1、胶体金免疫层析试纸条用于破伤风抗体的检测。首先,我们使用柠檬酸钠还原氯金酸的方法,制备了直径为40 nm的胶体金颗粒,用目测法、紫外吸收法对所制备的纳米金进行了评价。然后,将胶体金作为标记探针,通过静电吸附作用标记上破伤风原抗原(人源)。分别将破伤风原抗原和破伤风抗体固定在硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,采用双抗原夹心法原理构建了破伤风抗体胶体金快速检测试纸条。本方法对破伤风抗体的检测限为0.01 IU/mL,特异性良好。试纸条在4°C密封保存6个月,检测效果几乎不变。对10个血清样品进行检测,检测结果与酶联免疫(ELISA)方法一致。2、Cu:Zn-In-S/ZnS量子点免疫层析试纸条用于破伤风抗体的检测。首先制备了油溶性的Cu:Zn-In-S/ZnS量子点,通过巯基十一酸进行配体交换,得到水溶性的量子点,并对其进行了红外、紫外、荧光光谱的表征以及光稳定性考察。接下来使用纯化后的水溶性Cu:Zn-In-S/ZnS量子点通过化学键合反应标记上羊抗人IgG(Fc),建立了基于量子点的荧光免疫层析试纸条,检测线和质控线分别为破伤风原抗原和人IgG,通过抗原抗体免疫反应在检测线上形成抗原-抗体-二抗-量子点的复合物结构,从而实现对破伤风抗体的检测。对该方法进行了灵敏度、特异性、稳定性考察,试纸条的检测限为0.001 IU/mL,比胶体金试纸条的灵敏度提高了10倍。对白喉抗体、百日咳抗体、麻疹抗体、狂犬病毒抗体四种抗体进行交叉反应,结果表明该方法具有良好的特异性。对阴性血清样品进行加标检测,呈现良好的线性响应关系,表明该方法对破伤风抗体可以实现定量检测,在临床定量检测方面有很好的应用前景。
【关键词】：破伤风 免疫层析试纸条 胶体金 Cu:Zn-In-S/ZnS量子点
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R517.3;R446.6
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 绪论11-30
• 1.1 破伤风概述11-14
• 1.1.1 破伤风的致病机理11-12
• 1.1.2 破伤风的危害12
• 1.1.3 破伤风的防治12-13
• 1.1.4 破伤风抗体水平的检测13-14
• 1.2 基于纳米颗粒的免疫层析试纸条技术的概述14-17
• 1.2.1 免疫层析试纸条的组成16
• 1.2.2 免疫层析试纸条技术原理16-17
• 1.3 胶体金免疫层析试纸条技术及其应用17-22
• 1.3.1 胶体金的制备方法17-18
• 1.3.2 胶体金的性质18-19
• 1.3.3 胶体金免疫层析试纸条技术的应用19-21
• 1.3.4 胶体金免疫层析试纸条技术的优点21-22
• 1.4 量子点免疫层析试纸条技术及其应用22-27
• 1.4.1 量子点的性质22-24
• 1.4.2 量子点的制备方法24-25
• 1.4.3 量子点免疫层析试纸条技术的应用25-27
• 1.5 基于其它纳米材料的免疫层析试纸条及其应用27-28
• 1.6 本论文的研究内容28-30
• 第二章 基于胶体金免疫层析试纸条检测破伤风抗体30-48
• 2.1 引言30-31
• 2.2 实验仪器与试剂31-32
• 2.3 实验方法32-37
• 2.3.1 胶体金溶液的制备32
• 2.3.2 胶体金标记破伤风原抗原32-33
• 2.3.3 胶体金标记破伤风原抗原最优条件的选择33-35
• 2.3.4 胶体金试纸条可行性探究35
• 2.3.5 检测线及质控线上蛋白浓度的选择35
• 2.3.6 试纸条的组装35-36
• 2.3.7 跑样时间的选择36
• 2.3.8 破伤风抗体检测的标准曲线的建立36
• 2.3.9 胶体金试纸条的特异性考察36
• 2.3.10 稳定性考察36
• 2.3.11 实际样品检测36-37
• 2.4 结果与讨论37-46
• 2.4.1 实验原理37-38
• 2.4.2 胶体金质量评价38-39
• 2.4.3 胶体金标记破伤风原抗原的条件优化39-41
• 2.4.4 胶体金试纸条可行性探究41-42
• 2.4.5 检测线及质控线上蛋白浓度的选择42-43
• 2.4.6 跑样时间的选择43
• 2.4.7 试纸条检测方法的建立43-44
• 2.4.8 试纸条的特异性44-45
• 2.4.9 试纸条的稳定性45-46
• 2.4.10 血清样品检测46
• 2.5 结论46-48
• 第三章 基于Cu:Zn-In-S/ZnS量子点免疫层析试纸条检测破伤风抗体48-67
• 3.1 引言48-49
• 3.2 实验仪器与试剂49-50
• 3.3 实验方法50-54
• 3.3.1 Cu:Zn-In-S/ZnS量子点的制备50-51
• 3.3.2 Cu:Zn-In-S/ZnS量子点标记羊抗人IgG(Fc)51
• 3.3.3 Cu:Zn-In-S/ZnS量子点标记羊抗人IgG(Fc)实验条件的优化51-52
• 3.3.4 量子点试纸条对破伤风抗体检测的可行性研究52
• 3.3.5 检测条件的优化52-53
• 3.3.6 量子点试纸条对破伤风抗体检测的标准曲线的建立53
• 3.3.7 量子点试纸条的特异性考察53-54
• 3.3.8 量子点试纸条的稳定性考察54
• 3.3.9 实际样品检测54
• 3.4 结果与讨论54-65
• 3.4.1 实验原理54-55
• 3.4.2 量子点的表征55-58
• 3.4.3 Cu:Zn-In-S/ZnS量子点标记羊抗人IgG(Fc)58-59
• 3.4.4 量子点试纸条对破伤风抗体检测的可行性研究59-60
• 3.4.5 实验条件的优化60-63
• 3.4.6 量子点试纸条检测方法的建立63-64
• 3.4.7 量子点试纸条的特异性考察64-65
• 3.4.8 试纸条稳定性考察65
• 3.4.9 实际样品检测65
• 3.5 结论65-67
• 第四章 结论67-69
• 参考文献69-77
• 致谢77-78
• 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果78

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