狼疮肾炎患者血清定量蛋白质组学研究

发布时间：2017-07-30 16:36

  本文关键词：狼疮肾炎患者血清定量蛋白质组学研究

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【摘要】：目的：利用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation, iTRAQ)技术结合2维液相色谱-串联质谱(two-dimensional liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2D-LC-MS/MS)技术筛选狼疮肾炎(Lupus Nephritis, LN)和系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus, SLE)非肾炎患者患者血清差异表达蛋白。为LN的早期诊断以及病情监控,从血清定量蛋白质组学的方向提供新的角度和思路。方法：采用LN患者和SLE非肾炎患者血清标本作为研究对象,并以健康人群血清为对照。利用安捷伦多重亲和排除系统(Agilent multiple affinity removal LC column-Human 14, MARS)分别去除各组血清中的14种高丰度蛋白,并对低丰度蛋白进行超滤浓缩,分别标记为：①系统性红斑狼疮肾炎组(LN-low);②SLE非肾炎组(SLE-low);③健康对照组(N-low)。运用iTRAQ技术构建SLE非肾炎患者和LN患者在疾病不同阶段的差异蛋白表达谱,并将所有的差异表达蛋白进行Gene Ontology(简称GO)分类和信号通路分析(Ingenuity Pathway Analysis, IPA);随后用免疫印迹法(Western-Blot, WB)对差异蛋白--载脂蛋白B (Apolipoprotein B, APOB)、补体Clq子组件单元C(Complement C1q subcomponent subunit C, C1QC)和血清淀粉样蛋白A1 (Serum Amyloid A1, SAA1)进行蛋白水平的鉴定；最后使用SAA1 (Human) ELISA Kit测定SAA1在LN、SLE非肾炎组和健康对照组血清样本中的浓度,并用SPSS进行统计学分析。结果：1、用SDS-PAGE电泳来验证待测血清高丰度蛋白的去除效率,结果显示：可见的蛋白条增多,一些原本未见的低丰度蛋白条带显现出来；使用Quantity One软件来做进一步的分析比较,98%以上的高丰度蛋白已被去除。2、经iTRAQ联合2D-LC-MS/MS分析,共鉴定出302个非冗余蛋白(95%的可信区间)。通过设置差异蛋白的筛选标准：Cut-off值为ProtScore (unused)1.5,且P0.05, Ratio1.2(上调)或Ratio0.8(下调)。得到243个差异蛋白,其中LN组与健康对照组比较,有235个差异蛋白(上调蛋白233个,下调蛋白2个)；SLE非肾炎组与健康对照组比较,有243个差异蛋白(上调蛋白3个,下调蛋白240个)；LN组与SLE非肾炎组比较,有243个差异蛋白,且全部是上调蛋白。3、生物信息分析可知,差异蛋白主要位于细胞外,发挥炎症反应或者急性反应的生物学作用；在IPA分析上差异蛋白的信号途径主要有LXR/RXR激活、FXR/RXR激活以及补体系统等。用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve, ROC曲线)分析血清SAA1在SLE非肾炎和LN的表达情况,其曲线下面积(area under the ROC curve,记为AUC)诊断LN为0.843,P=0.001,当SAA1的Cut-off值为1.555μg/mL时,灵敏度为70.5%,特异度为85.7%。结论：1、经iTRAQ结合2D-LC-MS/MS技术分析,LN和SLE非肾炎之间存在243个的差异表达蛋白,且差异蛋白SAA1可能是诊断LN的潜在分子标志物2、SLE与LN的发生发展涉及机体多条作用通路,如免疫异常、机体急性反应以及血脂异常等。炎性反应可能是促进SLE与LN发生发展的主要因素。
【关键词】：系统性红斑狼疮 狼疮性肾炎 iTRAQ 载脂蛋白B 补体C1q子组件单元C 血清淀粉样蛋白A1
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R593.242;R446.1
【目录】：

• 个人简历3-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-15
• 材料与方法15-28
• 结果28-59
• 讨论59-65
• 本课题的创新点和展望65-66
• 参考文献66-74
• 附录74-76
• 综述76-90
• 参考文献84-90
• 致谢90-91
• 攻读研究生期间发表的学术论文91

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本文编号：595197