亚胺培南诱导肺炎克雷伯菌产生耐药及耐药机制的研究

发布时间：2017-08-05 04:01

  本文关键词：亚胺培南诱导肺炎克雷伯菌产生耐药及耐药机制的研究

  更多相关文章： 亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌 β-内酰胺酶 AmpC酶 ompK35

【摘要】：目的:通过分析亚胺培南诱导肺炎克雷伯菌的耐药特征探讨Amp C酶和omp K35蛋白在亚胺培南诱导肺炎克雷伯菌耐药机制中的作用。肺炎克雷伯菌(Klebsiella Pneumoniae,KPN)是临床分离及医院感染的重要致病菌之一,于1893年从大叶性肺炎患者的肺组织中首次分离到,可引起肺炎、尿路感染、败血症、伤口感染、脑膜炎等多种疾病,现已成为医院感染的重要病原菌。由于抗菌药物的大量使用,使肺炎克雷伯菌的耐药十分普遍,碳青霉烯类抗生素是治疗多重耐药肺炎克雷伯菌的最强效的抗生素,包括亚胺培南、美洛培南等。然而,随着碳青霉烯类抗生素的大量使用,全球许多地区出现了碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌感染的报道,给临床和治疗造成了极大困难。在国内,研究亚胺培南诱导肺炎克雷伯菌耐药报道的还不是很多,因此本课题有一定的创新性。方法:1收集标本分离临床收集肺炎克雷伯菌株共240株。在我院,培养标本主要集中在重症监护病房、神经外科病房、神经内科病房、呼吸科病房,泌尿外科病房等。由于抗生素的大量使用,以上几个病区肺炎克雷伯菌的鉴定率和耐药率都比较高,所以菌株收集主要来源于以上几个病区。2检测方法及监测指标首先采用K-B法测定10种临床常用抗生素的耐药情况,所选取的药物有哌拉西林、亚胺培南、庆大霉素、氨曲南、头孢他啶、左旋氧氟沙星、阿米卡星、头孢吡肟、环丙沙星和多黏菌素B,并提取亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌株。其次采用琼脂稀释法检测亚胺培南最低抑菌浓度。然后采用三维实验的方法分析亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌所产β-内酰胺酶的类型。针对肺炎克雷伯菌株,采用普通PCR方法检测omp K35基因,采用多重PCR的方法检测质粒携带的Amp C酶基因,用荧光定量RT-PCR方法检测omp K35基因表达情况;同时对产Amp C酶的肺炎克雷伯菌用RT-PCR方法检测Amp C酶基因的表达量情况。3统计方法所有的数据显示,均数±标准差。单因素方差分析和t检验进行组间差异分析。当P值小于0.05时,其差异有显著性。结果:1针对240株肺炎克雷伯菌,所选取的临床常用的抗菌药物有哌拉西林、亚胺培南、庆大霉素、氨曲南、头孢他啶、左旋氧氟沙星、阿米卡星、头孢吡肟、环丙沙星和多黏菌素B10种药物进行耐药实验,结果显示肺炎克雷伯菌对这些药物的耐药率依次为:39.18%,35.36%,34.45%,32.18%,30.36%、28.72%、27.39%、24.90%,13.72%和0%。2在240株肺炎克雷伯菌株中,共检测到48株产β-内酰胺酶菌株,β-内酰胺酶的检出率20.00%(48/240)。其中产Amp C酶的菌株共有25株(52.08%),产金属酶的菌株有4株(8.33%),产ESBL的菌株有11株(22.92%),同时产Amp C酶和超广谱β-内酰胺酶的有3株(6.25%);还有5株菌(10.42%)的产酶类型有待分析。通过三维水解实验检测结果发现,有7株菌所产的Amp C酶对IMP有一定的水解作用。3 PCR、多重PCR检测肺炎克雷伯菌IMP耐药结果显示,在产Amp C酶的菌株中,Amp C酶的基因含量均有不同程度的增加,其中最少增加4.44倍,最多增加354.59倍。90株IMP耐药的KP菌株中,omp K35基因检测为阴性的菌株有40株,占IMP耐药KP菌株总数的44.44%(40/90),阳性菌株有50株,占总数的55.56%(50/90)。4在荧光定量RT-PCR对IRKp的omp K35基因表达蛋白量的检测中,25株产Amp C酶KP菌株中,12株菌omp K35基因表达量减低,13株菌omp K35基因表达量正常;在25株产Amp C酶的KP菌株中微弱水解IMP的菌株有7株,其Amp C酶基因的表达量均有明显升高,其中5株菌同时伴有omp K35基因表达量降低。结论:1亚胺培南能诱导肺炎克雷伯菌产生耐药。2 Amp C酶的存在是导致KP对IMP耐药的一个重要因素,其水解活动可能在耐药机制中起到重要作用。3 Omp K35表达量降低是KP对IMP耐药的重要原因之一。
【关键词】：亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌 β-内酰胺酶 AmpC酶 ompK35
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R446.5
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-20
• 结果20-24
• 附图24-30
• 附表30-33
• 讨论33-37
• 结论37-38
• 参考文献38-40
• 综述 产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌40-56
• 参考文献47-56
• 致谢56-57
• 个人简历57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 柳玲;;相对定量的2~(-△△CT)法分析HLA-G基因在子宫内膜异位症中的表达[J];中国优生与遗传杂志;2007年09期

2 赵焕英;包金风;;实时荧光定量PCR技术的原理及其应用研究进展[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2007年04期

3 陈东科,张志敏,张秀珍;三维法检测β内酰胺酶的影响因素探讨及方法的改进[J];中华检验医学杂志;2003年10期

4 刘朝晖,陈劲龙,叶惠芬,杨银梅,张溪林,曾军;1998～2001年克雷伯杆菌耐药监测分析[J];中华内科杂志;2003年10期

5 文细毛,任南,徐秀华,黄勋;全国医院感染监控网医院感染病原菌分布及耐药性分析[J];中华医院感染学杂志;2002年04期

6 刘朝晖;陈劲龙;;克雷伯杆菌院内感染[J];世界感染杂志;2004年02期

，

本文编号：623014