碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌相关基因和质粒的分子流行病学研究

发布时间：2017-08-06 20:00

  本文关键词：碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌相关基因和质粒的分子流行病学研究

  更多相关文章： 鲍曼不动杆菌 碳青霉烯类 耐药基因 bla OXA-23 CC92 质粒

【摘要】：目的明确本地区临床分离鲍曼不动杆菌的分布特点及对碳青霉烯类药物的耐药情况,检测碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的A、B、D类碳青霉烯酶相关耐药基因。比对其分子分型,明确各菌株间的进化关系,对碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌流行病学进行分析。同时探索质粒水平传播情况,为临床用药提供科学依据和实验数据。材料与方法收集成都医学院第一附属医院2012~2013的110株非重复临床鲍曼不动杆菌,采用琼脂二倍稀释法进行药敏试验筛选出碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌;PCR鉴定鲍曼不动杆菌种属,扩增检测碳青霉烯类相关基因bla KPC,bla IMP,bla VIM-1,bla SIM,bla NDM-1,bla OXA-23,bla OXA-24,bla OXA-51,bla OXA-58和bla OXA-235;选择多位点序列分型来判断亲缘关系;通过接合实验、质粒测序,分析碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌携带质粒的功能。结果110株鲍曼不动杆菌中共有67株(60.9%,67/110)对碳青霉烯类耐药,这67株均100%检出rec A、16S rRNA和bla OXA-51,其中54株(80.60%,54/67)携带bla OXA-23。67株CRAB中共有52株(77.62%,52/67)属于克隆复合体92(CC92),其中Sequence Type 92(ST 92)型是最主要的ST型,其次分别为ST195型、ST136型、ST843型和ST75型。从52号碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌中分离发现新质粒pAB52(Genbank:KR030046),该质粒携带的毒力作用元件可能与细菌生长适应性相关。结论1.附属医院鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制与携带碳青霉烯酶基因bla OXA-23有关;2.碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的克隆复合体以CC92为主;3.发现一株碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌携带质粒pAB52,该质粒中的毒力基因可能与碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌的适应性相关。
【关键词】：鲍曼不动杆菌 碳青霉烯类 耐药基因 bla OXA-23 CC92 质粒
【学位授予单位】：成都医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R446.5
【目录】：

• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 英文缩略语表11-12
• 前言12-15
• 第一部分 110株鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物的药敏试验15-20
• 1.1 实验材料15
• 1.1.1 实验菌株15
• 1.1.2 试剂及仪器15
• 1.2 实验方法15-17
• 1.2.1 菌种收集及鉴定15
• 1.2.2 最低抑菌浓度检测15
• 1.2.3 菌株复苏15-16
• 1.2.4 抗菌药物的配制16
• 1.2.5 含梯度浓度抗菌药物的MH琼脂平板的制备16
• 1.2.6 待测菌液的制备、接种及孵育16
• 1.2.7 读取并记录结果16
• 1.2.8 统计实验数据16-17
• 1.3 实验结果17-20
• 1.3.1 药敏实验结果17
• 1.3.2 标本来源统计17-20
• 第二部分 碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌相关基因的研究20-25
• 2.1 实验材料20
• 2.1.1 实验菌株20
• 2.2 实验方法20-22
• 2.2.1 基因的检测20-22
• 2.2.2 PCR测序22
• 2.3 实验结果22-25
• 2.3.1 rec A、16S rRNA和bla_(OXA-51)鉴定结果22
• 2.3.2 bla_(OXA-23)检测结果22-23
• 2.3.3 其他耐药基因检测结果23-25
• 第三部分 多位点序列分型研究鲍曼不动杆菌亲缘关系25-33
• 3.1 MLST研究方案25
• 3.2 实验材料25-26
• 3.2.1 实验菌株25
• 3.2.2 实验试剂及仪器25-26
• 3.3 实验方法26-27
• 3.3.1 细菌DNA模板的制备26
• 3.3.2 PCR引物合成26-27
• 3.3.4 PCR 产物送上海铂尚生物技术公司测序27
• 3.4 实验结果27-33
• 3.4.1 MLST实验结果27-29
• 3.4.2 CRAB29
• 3.4.3 CIAB29-30
• 3.4.4 CSAB30
• 3.4.5 与数据库进行比较30-33
• 第四部分 质粒接合实验研究碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌水平转移能力33-42
• 4.1 实验材料33
• 4.1.1 实验菌株33
• 4.1.2 实验试剂与仪器33
• 4.2 质粒接合33-34
• 4.3 质粒提取34-35
• 4.4 电转感受态细胞的制备35
• 4.5 电击转化35-36
• 4.6 质粒分析36-38
• 4.6.1 酶切实验36
• 4.6.2 连接实验36-38
• 4.7 实验结果38-42
• 4.7.1 质粒接合实验结果38
• 4.7.2 pAB52质粒的发现38-40
• 4.7.3 数据提交40
• 4.7.4 RAST分析40-42
• 讨论与结论42-46
• 参考文献46-52
• 文献综述52-69
• 参考文献65-69
• 攻读学位期间的研究成果69-70
• 致谢70

【参考文献】

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