外源性一氧化碳释放分子（CORM-2）对脂多糖刺激后中性粒细胞功能的调控作用及分子机制

发布时间：2017-08-21 01:08

  本文关键词：外源性一氧化碳释放分子（CORM-2）对脂多糖刺激后中性粒细胞功能的调控作用及分子机制

  更多相关文章： 脓毒症 脂多糖 CORM-2 中性粒细胞 颗粒释放 吞噬 ERK1/2

【摘要】：背景与目的脓毒症(Sepsis)是主要由各种单一或混合型感染引起的一种全身性炎症反应综合症,脓毒症发生发展严重时可以导致多器官功能的衰竭、脓毒性休克甚至死亡。关于脓毒症的发病机制十分复杂,至今尚未阐明,在脓毒症发生的早期,机体感染部位可以迅速招募大量中性粒细胞,这些招募来的中性粒细胞可以通过吞噬病原微生物、脱颗粒释放各种蛋白酶等物质来达到杀灭细菌的作用。脂多糖(LPS)是革兰氏阴性杆菌细胞壁的重要组成成分,是革兰氏阴性杆菌所致的脓毒症时最重要的致病成分。作为外源性刺激因子LPS刺激中性粒细胞可以促进其释放大量的IL-6、白细胞三烯B4、活性氧的炎性介质,且LPS刺激的中性粒细胞可以在远处器官大量的浸润,而这是脓毒症时SIRS以远处器官损伤的重要原因。一氧化碳(CO)是一种无色无味的有毒气体,前期实验结果表明,CORM-2释放的CO可以显著的改善盲肠结扎并穿孔(CLP)小鼠以及LPS刺激小鼠的炎症反应,有效的保护其重要脏器的损伤,提高生存率。而对LPS刺激的中性粒细胞,CORM-2对其功能的调控尚无明确的报道。方法采集健康成年志愿者静脉血,采用Ficoll离心法分离健康成年人血液中中性粒细胞,采用随机数字表法随机分为对照组(CONTROL),内毒素(LPS)组,LPS+CORM-2(10μM)组,LPS+CORM-2(50μM)组,LPS+iCORM-2组。采用流式细胞术检测中性粒细胞的早期凋亡、活性氧的释放以及吞噬功能;采用流式细胞术以及Elisa方法检测中性粒细胞颗粒释放情况;采用琼脂糖凝胶细胞迁移模型检测中性粒细胞迁移能力;在荧光显微镜下计数中性粒细胞胞外诱捕网(NET)的数量;采用免疫蛋白印迹(WB)检测中性粒细胞胞内蛋白P38、ERK1/2、AKT的表达。结果和结论1.LPS刺激能明显促进中性粒细胞的早期凋亡、抑制中性粒细胞的迁移能力,而使用CORM-2干预后并不能明显调控LPS对中性粒细胞的早期凋亡以及迁移能力的影响。实验表明CORM-2对LPS刺激的中性粒细胞的早期凋亡以及迁移能力无明显的影响。2.LPS刺激能明显促进中性粒细胞颗粒的释放以及吞噬功能,而使用CORM-2干预后能明显的抑制LPS刺激中性粒细胞活性氧产生以及颗粒释放,并且可以进一步增加中性粒细胞的吞噬功能。实验表明CORM-2可以明显的保护LPS刺激中性粒细胞的以确保其能更好的发挥功能。3.LPS刺激并不能促进中性粒细胞胞外诱捕网的产生,而CORM-2干预能有效的促进LPS刺激中性粒细胞胞外诱捕网的产生。实验表明CORM-2可以明显的促进中性粒细胞捕获并杀灭细菌的能力。4.LPS刺激后中性粒细胞关键蛋白ERK1/2、P38、AKT的表达均发生了一定程度的上升,而使用CORM-2干预后ERK1/2、P38、AKT的表达得到了大幅度的上升。实验表明CORM-2改善LPS刺激的中性粒细胞功能可能与ERK1/2、P38、AKT有关。
【关键词】：脓毒症 脂多糖 CORM-2 中性粒细胞 颗粒释放 吞噬 ERK1/2
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R459.7
【目录】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 英文缩写及符号索引一览表12-14
• 前言14-16
• 第一部分 中性粒细胞LPS刺激模型的建立以及外源性一氧化碳（CORM-2）的使用方案的确立16-29
• 第一节 分离并鉴定健康成人外周静脉血中性粒细胞16-20
• 1. 材料与方法16-17
• 2. 结果17-19
• 3. 讨论19
• 4. 结论19-20
• 第二节 体外建立与验证中性粒细胞LPS刺激模型20-23
• 1. 材料与方法20-21
• 2. 结果21-22
• 3. 讨论22
• 4. 结论22-23
• 第三节 确立外源性一氧化碳（CORM-2）的使用方案23-29
• 1. 材料与方法23-24
• 2. 结果24-26
• 3. 讨论26-27
• 4. 结论27-29
• 第二部分 外源性一氧化碳（CORM-2）对LPS刺激中性粒细胞功能的调控29-48
• 第一节 外源性一氧化碳（CORM-2）对LPS刺激中性粒细胞迁移的影响29-34
• 1. 材料与方法29-30
• 2. 结果30-31
• 3. 讨论31-33
• 4. 结论33-34
• 第二节 外源性一氧化碳（CORM-2）对LPS刺激中性粒细胞颗粒释放的影响34-40
• 1. 材料与方法34-35
• 2. 结果35-38
• 3. 讨论38-39
• 4. 结论39-40
• 第三节 外源性一氧化碳（CORM-2）对LPS刺激中性粒细胞胞外诱捕网（NET）的影响40-44
• 1. 材料与方法40-41
• 2. 结果41-42
• 3. 讨论42-43
• 4. 结论43-44
• 第四节 外源性一氧化碳（CORM-2）对LPS刺激中性粒细胞吞噬功能的影响44-48
• 1. 材料与方法44-45
• 2. 结果45-46
• 3. 讨论46-47
• 4. 结论47-48
• 第三部分 外源性一氧化碳（CORM-2）对LPS刺激中性粒细胞功能影响的分子机制48-63
• 第一节 外源性一氧化碳（CORM-2）对LPS刺激中性粒细胞蛋白P38的影响48-53
• 1. 材料与方法48-50
• 2. 结果50-51
• 3. 讨论51-52
• 4. 结论52-53
• 第二节 外源性一氧化碳（CORM-2）对LPS刺激中性粒细胞蛋白ERK1/2的影响53-58
• 1. 材料与方法53-54
• 2. 结果54-55
• 3. 讨论55-57
• 4. 结论57-58
• 第三节 外源性一氧化碳（CORM-2）对LPS刺激中性粒细胞蛋白AKT的影响58-63
• 1. 材料与方法58-59
• 2. 结果59-60
• 3. 讨论60-62
• 4. 结论62-63
• 总结63-66
• 参考文献66-79
• 致谢79-80
• 攻读硕士期间发表文章80-81

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8 李钺,李生伟;原发性脾性中性粒细胞减少综合症1例[J];重庆医学;2000年05期

9 尚东;杨岚;党晓敏;;吸烟对中性粒细胞功能影响的研究[J];陕西医学杂志;2013年06期

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1 邓新立;黄文荣;丛玉隆;邹德勇;;重组人粒细胞集落刺激因子对中性粒细胞及其表面分子表达的影响[A];第十届全军检验医学学术会议论文汇编[C];2005年

2 邓新立;;重组人粒细胞集落刺激因子对中性粒细胞及其表面分子表达的影响[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年

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4 董炜;谢挺;董叫云;金曙雯;花兰女;宋菲;青春;陆树良;;晚期糖基化终末产物对中性粒细胞生物学行为的影响[A];第六届全国烧伤救治专题研讨会论文汇编[C];2009年

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6 余霞;姚志荣;;中性粒细胞在慢性皮肤粘膜念珠菌病发病中的作用[A];中华医学会第14次全国皮肤性病学术年会论文汇编[C];2008年

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