超声辐照载多西紫杉醇微泡对人肝癌细胞MHCC97-H的促凋亡作用及PCNA表达的研究

发布时间：2017-08-21 08:45

  本文关键词：超声辐照载多西紫杉醇微泡对人肝癌细胞MHCC97-H的促凋亡作用及PCNA表达的研究

  更多相关文章： 微泡 肝癌 凋亡 MAPK信号转导 微泡 肝癌 超声 PCNA

【摘要】：第一部分超声辐照载多西紫杉醇微泡对肝癌细胞MHCC97-H的促凋亡作用及机制目的探讨超声辐照载多西紫杉醇微泡诱导人高转移性肝癌细胞MHCC97-H凋亡的影响及其作用过程细胞凋亡的机制,为肝癌临床分子靶向治疗提供实验依据。方法将人高转移肝癌细胞MHCC97-H随机分为四组:对照组(CON)、载多西紫杉醇微泡组(DM)、超声辐照组(US)、超声辐照载多西紫杉醇微泡组(DM+US)。分别采用MTT法检测各组细胞存活率、倒置显微镜观察细胞形态学变化、流式细胞仪检测细胞凋亡情况,凋亡试剂盒检测细胞凋亡蛋白表达变化情况,细胞免疫荧光法、流式细胞仪检测增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达,Western-blot检测MAPK通路蛋白及PCNA蛋白的表达。结果24 h后,MTT法显示DM组、US组、DM+US组细胞存活率分别为(76.0±3.0)%、(73.0±5.0)%和(52.0±6.0)%,DM+US组降低最明显;倒置显微镜下观察CON组肿瘤细胞形态大小正常,生长旺盛,而DM组、US组、DM+US组细胞数量均有减少,细胞间隙增加,形态不规则,部分细胞脱落悬浮在培养液中,DM+US组改变更明显;流式细胞仪显示DM+US组细胞凋亡率为(26.81±2.82)%,与CON组(2.90±0.99)%比较差异有显著统计学意义(P0.05);凋亡试剂盒检测可见DM+US组多种凋亡蛋白表达变化:Caspase-3、c IAP-1、SMAC和HSP70等;细胞免疫荧光法、流式细胞仪检测PCNA蛋白的表达均显示DM+US组PCNA蛋白表达降低;蛋白免疫印迹法显示DM+US组细胞p-ERK 1/2蛋白表达水平增多,p-p38蛋白表达下降,PCNA蛋白表达降低。结论超声辐照载多西紫杉醇微泡通过影响ERK 1/2和p 38信号转导通路,调节PCNA等相关蛋白的表达而诱导人肝癌细胞MHCC 97-H的凋亡。第二部分超声辐照载多西紫杉醇微泡对肝癌细胞裸鼠成瘤的影响以及PCNA的表达目的本实验通过超声辐照载多西紫杉醇微泡对人肝癌细胞MHCC97-H裸鼠皮下荷瘤成瘤情况以及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,为超声载药治疗肝癌提供新的研究思路。方法建立人肝癌细胞MHCC97-H裸鼠皮下荷瘤模型并治疗,观察裸鼠生长情况,30天后处死裸鼠,分析裸鼠体重增长,取出肿瘤组织,HE染色、透射电镜观察肿瘤组织细胞形态,免疫组化检测PCNA蛋白的表达情况,并采用图像分析测定光密度值。结果成功建立了人高转移肝癌细胞MHCC97-H裸鼠荷瘤模型,成瘤率100%。经HE染色病理观察证实为肝癌,实验组裸鼠生长状态良好,未见明显异常活动;裸鼠体重变化DM+US组与CON组比较,差异有统计学意义(P0.05);HE染色和透射电镜观察细胞形态、结构表明DM+US组肿瘤组织内细胞密度减少,细胞明显凋亡;免疫组化检测了裸鼠肿瘤组织内PCNA蛋白的表达,DM+US组光密度值为(69.42±16.72),CON组为(109.76±15.37),差异具有统计学意义(P0.05)。结论超声辐照载多西紫杉醇微泡对人高转移肝癌细胞MHCC97-H荷瘤裸鼠体内成瘤有明显的抑制作用,并抑制了PCNA蛋白的表达。
【关键词】：微泡 肝癌 凋亡 MAPK信号转导 微泡 肝癌 超声 PCNA
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7;R445.1
【目录】：

• 缩略语表4-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-14
• 文献回顾14-24
• 第一部分 超声辐照载多西紫杉醇微泡对人肝癌细胞MHCC97-H的促凋亡作用及机制24-41
• 0 引言24
• 1 材料24-27
• 2 方法27-31
• 3 结果31-37
• 4 讨论37-41
• 第二部分 超声辐照载多西紫杉醇微泡对肝癌细胞裸鼠成瘤的影响以及PCNA的表达41-53
• 0 引言41
• 1 材料41-43
• 2 方法43-46
• 3 结果46-50
• 4 讨论50-53
• 小结53-54
• 参考文献54-62
• 个人简历和研究成果62-64
• 致谢64

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本文编号：711935