下丘脑弓状核Src酪氨酸蛋白激酶参与外周炎症痛的研究

发布时间：2017-09-01 03:20

  本文关键词：下丘脑弓状核Src酪氨酸蛋白激酶参与外周炎症痛的研究

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【摘要】：目的:本实验旨在研究外周炎症时,通过改变下丘脑弓状核(hypothalamic arcuate nucleus,ARC)区的Src酪氨酸蛋白激酶的表达,观察NMDA受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)的NR2B亚单位及相关信号分子如PKC、PKA、CaMKII的变化,探讨Src对外周炎症引起的痛觉过敏的影响。方法:用完全弗氏佐剂(Complete Freund's Adjuvant,CFA)建立大鼠外周炎症模型;用Von Frey(VFF)法和热辐射-缩腿法测定大鼠痛阈变化;用转棒实验(rota-rod test)测定大鼠的运动功能变化;用Western Blot方法检测ARC区域NR2B,pNR2B(Y1472),Src,pSrc(Y416),PKA,PKCγ,pCa MKIIα(T286)的蛋白表达;ARC内微量注射NMDA受体抑制剂MK-801、含NR2B的NMDA受体抑制剂ifenprodil、PKC抑制剂chelerythrine、Src抑制剂PP2或Src小发夹结构RNA(sh RNA)慢病毒,观察CFA炎症大鼠蛋白表达变化以及对大鼠痛觉过敏的影响。结果:1、CFA炎症大鼠在造模后1、3、5、7、14天痛阈显著低于对照组大鼠(P0.05或0.001),表现为热辐射缩腿潜伏期缩短和VFF缩腿阈值降低,即出现痛觉过敏。2、与造模前比较,注射CFA后的1、3、7、14天,ARC组织内的Src和NR2B无论是蛋白总量还是磷酸化水平都明显升高(P0.05),PKCγ表达亦明显升高(P0.05);pCaMKIIα表达在1、3、7天明显下降(P0.05);PKA表达无明显变化(P0.05)。3、在造模后7天的大鼠ARC内分别微量注射MK-801,ifenprodil,chelerythrine,或PP2,机械痛阈与热痛阈均较对照组有不同程度的反转,在20min或30min时间点作用最大(P0.05,0.01或0.001)。4、Src慢病毒下调外周炎症大鼠ARC内Src、pSrc的蛋白表达(P0.05,0.01或0.001);造模后3天,Src慢病毒组(LV-sh-src+CFA组)的NR2B、pNR2B、PKCγ蛋白表达较对照组(na?ve+CFA组或LV-sh-NC+CFA组)出现显著下降(P0.05或0.01);造模后7天,Src慢病毒组的pNR2B蛋白表达仍较对照组明显下降(P0.05或0.001);造模后14天,Src慢病毒组的NR2B、pNR2B、PKCγ表达与对照组比较虽仍呈下降趋势但已没有统计学意义(P0.05);Src慢病毒组的PKA、p CaMKIIα表达与对照组相比,无统计学意义(P0.05)。5、大鼠ARC内感染Src慢病毒后,对外周炎症诱发的机械痛敏有显著影响,即造模后3、7、14天Src慢病毒组的机械痛阈与空载对照组相比显著升高,有统计学意义(P0.05);Src慢病毒组的热痛敏亦发生改变,即造模后3、14天Src慢病毒组的热痛阈升高,与空载对照组比较有统计学意义(P0.05)。结论:(1)ARC内的NR2B、蛋白激酶Src和PKC参与了大鼠外周炎症导致痛觉过敏的调节。(2)抑制ARC内Src的蛋白表达可以使NR2B和PKC的蛋白表达及活性都减弱,从而提示Src通过NR2B参与了ARC对外周炎症痛觉过敏的调节,并起着重要的作用。
【关键词】：下丘脑ARC 外周炎症痛 CFA大鼠 NMDA受体 NR2B亚单位 Src 慢病毒
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R402
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-12
• 实验材料及方法12-21
• 一、实验材料12-14
• 二、实验方法14-21
• 实验结果21-44
• 一、外周炎症诱发大鼠痛觉过敏21-23
• 二、下丘脑弓状核中NMDA受体亚单位NR2B及蛋白激酶的表达23-25
• 三、下丘脑弓状核给予NMDA受体拮抗剂及蛋白激酶抑制剂对外周炎症痛大鼠痛觉过敏的影响25-31
• 四、下丘脑弓状核慢病毒干扰Src酪氨酸蛋白激酶的表达对NR2B、蛋白激酶表达及对炎症大鼠痛觉过敏的影响31-44
• 讨论44-48
• 结论48-49
• 参考文献49-56
• 文献综述56-71
• 参考文献63-71
• 相关试剂成分及配制方法71-74
• 缩略词及中英文名对照表74-76
• 致谢76-78

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本文编号：769624