临床感染患者耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药机制及毒力研究

发布时间：2017-09-13 20:05

  本文关键词：临床感染患者耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药机制及毒力研究

  更多相关文章： 肺炎克雷伯菌 耐药性 碳青霉烯酶 荚膜 毒力因子

【摘要】：目的选取天津医科大学总医院临床感染患者分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(Carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP),测定其对各类抗菌药物的敏感性、统计感染患者的临床特点以分析感染CRKP的危险因素;探究CRKP耐药机制与碳青霉烯类药物敏感性的关系并检测肺炎克雷伯菌高毒力荚膜血清型及毒力基因的分布情况。方法收集天津医科大学总医院2014年5月至2015年5月临床感染患者分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌20株。采用全自动细菌鉴定仪Vitek2 Compact仪器及配套药敏卡对菌株进行鉴定及药敏试验,查询分离菌株所属患者的临床资料,对患者年龄、性别、科室、住院天数、基础疾病、分离标本类型、是否曾经入住ICU、是否曾经进行过侵袭性操作、分离CRKP前后抗生素使用情况及预后情况进行讨论;采用改良Hodge试验、乙二胺四乙酸(Ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)双纸片试验、Carba NP试验、碳青霉烯类抑制法(Carbapenem Inactivation Method,CIM)四种表型试验初筛碳青霉烯酶;采用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)检测耐药基因,包括碳青霉烯酶基因(KPC、IMP、VIM、NDM、SIM、OXA-48)、超广谱β-内酰胺酶基因(TEM、SHV和CTX-M)、Amp C酶基因(DHA)、膜孔蛋白编码基因(ompk35、ompk36);采用拉丝试验、生物被膜形成试验、血清杀伤试验用来检测菌株毒力情况;PCR方法检测荚膜血清型(K1、K2、K5、K20、K54、K57)及毒力基因(rmp A、aerobactin和fim H-1)。PCR阳性扩增产物基因测序结果提交Gen Bank在线数据库比对。结果20株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对头孢菌素类、碳青霉烯类等β-内酰胺类抗菌药物耐药率较高80%以上,对替加环素、阿米卡星及左氧氟沙星的耐药率较低在30%以下。感染患者主要来自老年医学病区的高龄患者及儿科病区的新生儿患儿,标本类型以呼吸道痰标本为主,医院获得性感染是感染的主要来源。改良Hodge试验检出KPC基因阳性11株(55%),EDTA双纸片试验检出金属酶阳性13株(65%),CIM试验阳性16株,Carba NP试验检出产A类酶11株,同时产A类酶、B类酶或D类酶9株;PCR结果表明,检出碳青霉烯酶KPC和NDM基因,分别为7株(35%)和8株(40%),超广谱β-内酰胺酶以SHV基因检出率最高,为16株(80%),Amp C酶DHA基因检出2株(10%),膜孔蛋白编码基因ompk35和ompk36分别缺失8株(40%)和13株(65%)。耐药基因组合分为7种方式,以同时产碳青霉烯酶、ESBLs和膜孔蛋白变异为主,占35%(7/20);其次是仅由ESBLs引起的耐药,占20%(4/20);仅产碳青霉烯酶伴随膜孔蛋白变异也占据一定比例,15%(3/20);产ESBLs合并膜孔蛋白变异和碳青霉烯酶合并高产ESBLs各占10%(2/20),其他组合方式10%(2/20)。rmp A基因阳性8株(40%),均为产碳青霉烯酶伴随膜孔蛋白变异株,5株产KPC,2株产NDM,1株同时产KPC和NDM基因,其中5株还同时携带ESBLs基因。Aerobactin基因6株(30%)阳性,与rmp A基因同时阳性5株,4株产KPC基因。fim H-1基因20株(100%)全阳性。检出高毒力荚膜血清型K1型3株、K57型1株,其中2株K1型同时携带rmp A和aerobactin基因,1株K1型和1株K57型菌株仅产rmp A基因,4株均为产KPC基因菌株。结论本研究临床感染患者分离耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对替加环素、阿米卡星、左氧氟沙星和环丙沙星耐药率较低,对头孢菌素等β-内酰胺类抗菌药物耐药率较高。高龄患者和新生儿是医院获得性感染CRKP的主要人群,侵袭性操作及环境消毒不合格是导致菌株院内流行传播的重要原因。临床感染患者分离的CRKP主要耐药机制是产碳青霉烯酶KPC和NDM基因,超广谱β-内酰胺酶合并膜孔蛋白缺失也是导致耐药的重要原因。检出产KPC基因的高毒力荚膜血清型K1、K57共4株,检出率较高,应引起临床重视。
【关键词】：肺炎克雷伯菌 耐药性 碳青霉烯酶 荚膜 毒力因子
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R440
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语10-12
• 前言12-16
• 研究现状、成果12-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的临床特征及药敏状况16-25
• 1.1 材料和方法16-17
• 1.1.1 材料16
• 1.1.2 方法16-17
• 1.2 结果17-21
• 1.2.1 药敏试验结果17-18
• 1.2.2 分离耐碳青霉烯肺炎克雷伯患者临床特点18-21
• 1.3 讨论21-24
• 1.3.1 药敏结果分析21-22
• 1.3.2 碳青霉烯肺炎克雷伯菌临床特点分析22-24
• 1.4 小结24-25
• 二、耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶表型测定和耐药机制研究25-43
• 2.1 材料和方法25-29
• 2.1.1 材料25-26
• 2.1.2 方法26-29
• 2.2 结果29-39
• 2.2.1 碳青霉烯酶表型试验结果29-31
• 2.2.2 耐药基因、膜孔蛋白检测结果31
• 2.2.3 同一患者不同部位分离细菌耐药基因分析31-32
• 2.2.4 耐药基因组合方式32
• 2.2.5 携带耐药基因与碳青霉烯抗生素耐药性的关系32
• 2.2.6 碳青霉烯酶表型试验与碳青霉烯酶基因检测结果比较32-35
• 2.2.7 PCR产物测序结果35-39
• 2.3 讨论39-42
• 2.3.1 碳青霉烯酶表型检测结果分析39-40
• 2.3.2 耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药机制分析40-42
• 2.4 小结42-43
• 三、耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌毒力表型、高毒力荚膜血清型及毒力基因检测43-55
• 3.1 材料和方法43-47
• 3.1.1 材料43-44
• 3.1.2 方法44-47
• 3.2 结果47-52
• 3.2.1 毒力表型试验结果47
• 3.2.2 高毒力荚膜血清型及毒力基因检出情况47-48
• 3.2.3 毒力表型试验与荚膜血清型、毒力基因的关系比较48
• 3.2.4 荚膜血清型、毒力基因与耐药基因的关系48
• 3.2.5 质粒接合试验48-49
• 3.2.6 PCR产物测序结果49-52
• 3.3 讨论52-54
• 3.4 小结54-55
• 结论55-56
• 参考文献56-63
• 发表论文情况说明63-64
• 综述 高毒力肺炎克雷伯菌毒力研究进展64-77
• 综述参考文献71-77
• 致谢77-78
• 个人简历78

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张嵘;王选;吕建新;;碳青霉烯类抗生素耐药K1型肺炎克雷伯菌一株的分离及耐药机制分析[J];中华医学杂志;2014年46期

2 朱雄;袁敏;刘佳;龚林;陈霞;禹蕙兰;陈海;李娟;;Carba NP碳青霉烯酶检测方法在医院感染监测中的应用[J];中华医院感染学杂志;2014年23期

3 管婧;卓超;苏丹虹;倪语星;孙景勇;汪复;朱德妹;胡付品;徐英春;张小江;俞云松;杨青;陈中举;孙自镛;张朝霞;季萍;单斌;杜艳;张泓;孔菁;徐元宏;沈继录;王传清;王爱敏;胡志东;李全;魏莲花;吴玲;胡云建;艾效曼;;2012年中国CHINET克雷伯菌属细菌耐药性监测[J];中国感染与化疗杂志;2014年05期

4 胡付品;朱德妹;汪复;俞云松;林洁;胡云建;艾效曼;胡志东;李金;徐元宏;沈继录;张泓;孔菁;张朝霞;季萍;王传清;王爱敏;倪语星;孙景勇;孙自镛;陈中举;卓超;苏丹虹;徐英春;张小江;魏莲花;吴玲;单斌;杜艳;陈佰义;储云卓;;2012年中国CHINET碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌的分布特点和耐药性分析[J];中国感染与化疗杂志;2014年05期

5 李莺;丁云芳;吴水燕;陶云珍;项龙;柏振江;陈红梅;;多重耐药肺炎克雷伯菌支气管肺泡灌洗液分离株耐药元件检测分析[J];中华临床感染病杂志;2014年02期

6 胡付品;朱德妹;汪复;蒋晓飞;杨青;黄文祥;贾蓓;徐元宏;沈继录;徐英春;张小江;胡云建;艾效曼;张朝霞;季萍;单斌;杜艳;卓超;苏丹虹;王传清;王爱敏;倪语星;孙景勇;孙自镛;陈中举;魏莲花;吴玲;张泓;孔菁;;CHINET监测2010年碳青霉烯类抗生素耐药肠杆菌科细菌的分布特点和药物敏感性[J];中国感染与化疗杂志;2013年01期

7 李静;胡志东;;耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌IMP-1型金属β-内酰胺酶的检测[J];中华临床感染病杂志;2011年03期

8 卓超;苏丹虹;倪语星;孙景勇;俞云松;杨青;孙自镛;简翠;汪复;朱德妹;胡付品;蒋晓飞;王传清;王爱敏;徐元宏;沈继录;徐英春;孙宏莉;张泓;李万华;单斌;杜艳;张朝霞;季萍;贾蓓;黄文祥;魏莲花;吴玲;胡云建;艾效曼;;2009年中国CHINET大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌耐药性监测[J];中国感染与化疗杂志;2010年06期

9 张嵘;蔡加昌;胡云建;周宏伟;陈功祥;;IMP-4型金属β内酰胺酶合并膜孔蛋白OmpK36缺失引起肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素高水平耐药[J];中华检验医学杂志;2010年09期

10 卓超;苏丹虹;朱德妹;胡付品;汪复;阮斐怡;孙自镛;简翠;徐英春;孙宏莉;倪语星;孙景勇;俞云松;杨青;王传清;薛建昌;张泓;李万华;胡云健;艾效曼;贾蓓;黄文祥;魏莲花;吴玲;张朝霞;季萍;;2007年CHINET大肠埃希菌和克雷伯菌属耐药性监测[J];中国感染与化疗杂志;2009年03期

，

本文编号：845607