多重荧光定量PCR检测艰难梭菌感染的方法探索

发布时间：2017-10-01 02:18

  本文关键词：多重荧光定量PCR检测艰难梭菌感染的方法探索

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【摘要】：目的:近年来,随着艰难梭菌流行菌株027等的出现,艰难梭菌的发病率及致死率越来越高,快速、准确检测艰难梭菌对临床决策非常重要。本研究旨在建立一种可以同时检测艰难梭菌主要毒素基因tcdA、tcdB的多重定量PCR方法。方法:收集2014.10-2015.03月期间临床送检的大便标本,进行分离培养,可疑菌落经基质辅助激光解吸飞行时间质谱技术及扩增16sRNA鉴定,获得的菌株分别采用普通PCR及Taqman探针法多重定量PCR检测艰难梭菌毒素基因tcdA、tcdB及管家基因TPI。结果:在收集到的107株符合要求的大便标本中,经鉴定共分离出20株艰难梭菌。普通PCR检测结果为:tcdA-tcdB-的菌株为4株,tcdA+tcdB+的菌株为16株,未发现tcdA-tcdB+的菌株,阳性率为18.7%。应用本研究设计的引物及探针对标准菌株进行检测发现tcdA扩增效率可达91%,最低检测限为101,TPI扩增效率仅为79%,最低检测限为102,未能成功检测到tcdB。Taqman探针法多重定量PCR由于TPI及tcdB探针设计不成功未能如期完成。结论:我院分离的艰难梭菌毒素基因阳性的比例较高,需引起重视;本实验设计的引物及探针有待进一步改善。
【关键词】：艰难梭菌 多重 定量 聚合酶链反应
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R440
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 第一部分 艰难梭菌的培养、鉴定及保存12-17
• 1 材料12-13
• 2 方法13-15
• 3 结果15
• 4 讨论15-17
• 第二部分 普通PCR检测艰难梭菌毒素基因tcd A、tcd B、管家基因TPI及 16s RNA17-21
• 1 材料17
• 2 方法17-19
• 3 结果19
• 4 讨论19-21
• 第三部分 探索Taqman探针多重定量PCR法检测艰难梭菌毒素基因tcd A、tcd B及管家基因TPI21-28
• 1 材料21-22
• 2 方法22-25
• 3 结果25-26
• 4 讨论26-28
• 全文小结28-29
• 参考文献29-31
• 文献综述31-42
• 参考文献38-42
• 致谢42-43
• 硕士期间发表的论文43

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本文编号：951762