可疑流行碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌耐药机制探索

发布时间：2017-10-05 06:27

  本文关键词：可疑流行碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌耐药机制探索

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【摘要】：目的1.通过分析我院2013-2014年度分离得到的41株碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌(CRE)对临床常用抗菌药物的耐药情况,为今后临床合理选择使用抗菌药物提供数据支持。2.采用分子分型方法对41株碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌(CRE)进行同源性检测,以便掌握菌株的同源性情况,为了解其在医院内流行情况,控制其流行提供科学依据。及进一步确定其医院及科室内流行情况。3.通过对该41株碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌(CRE)中碳青霉烯酶、超广谱β内酰胺酶(ESBLs)、Amp C酶等耐药基因检测及型别确定,以及分析外膜孔道蛋白基因表达情况,探求其对碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制,最终为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法1.采用法国梅里埃公司Vitek-2全自动细菌鉴定系统及配套药敏卡片,对细菌进行菌种鉴定并确定常用抗菌药物的敏感性。2.采用K-B法再次测定细菌对碳青霉烯类药物(美罗培南及亚胺培南)的抑菌圈直径,从而确认为耐碳青霉烯类菌株。3.采用ERIC-PCR方法(Enterbacterial repetitive intergenic consensus肠杆菌科基因间重复一致保守序列PCR)对41株碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌(CRE)进行DNA扩增,并进一步电泳,根据电泳条带分布分析细菌的同源性。4.采用聚合酶链反应(PCR)对41株碳青霉烯耐药菌株进行碳青霉烯酶、ESBLs、Amp C酶等耐药基因以及外膜孔道蛋白Ompk35及Ompk36基因筛查,并对外膜孔道蛋白Ompk35及Ompk36基因作DNA序列分析。5.采用荧光定量PCR(RT-PCR)方法对36株克雷伯属菌株外膜孔道蛋白Ompk35及Ompk36基因进行定量分析。结果1.41株碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌(CRE)对β-内酰胺类抗菌药物耐药高达80%,对喹诺酮类、四环素类及氨基糖苷类抗菌药物敏感率达85%,ERIC-PCR同源性分析显示儿科及新生儿科存在肺炎克雷伯菌及产酸克雷伯菌克隆流行菌株,无向其他科室。2.碳青霉烯酶表型确证示:Hodge试验阳性菌株10例,EDTA协同试验均阴性,碳青霉烯酶基因确证均阴性。3.高水平β内酰胺酶(ESBLs及Amp C酶)检测,每株菌至少存在1种β内酰胺酶表达。4.外膜孔道蛋白PCR结果显示41株耐药菌无外膜孔道蛋白基因缺失,97.22%外膜蛋白测序结果与野生菌株相比无改变,外膜孔道蛋白定量PCR分析显示,91.67%碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌及产酸克雷伯菌外膜蛋白表达量下降。结论我院分离的41株碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌对临床常见抗菌药物耐药情况严峻,四环素类、氨基糖甙类及喹诺酮类抗菌药敏感性较好,临床可作为用药参考;新生儿科及儿科存在克隆流行株,需注意病区清洁卫生、消毒隔离,医护人员要注意手卫生。这些耐药菌未分离出碳青霉烯酶耐药基因,可能的耐药机制为高水平β内酰胺酶表达合并外膜孔道蛋白表达下降。
【关键词】：碳青霉烯耐药 肠杆菌科细菌 同源性分析 外膜蛋白 耐药机制
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R446.5
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-13
• 研究现状、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 一、碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌耐药分析及同源性检测13-24
• 1.1 对象和方法13-17
• 1.1.1 菌株来源与鉴定13-14
• 1.1.2 主要实验仪器与试剂耗材14
• 1.1.3 实验方法14-17
• 1.2 结果17-21
• 1.2.1 药物敏感试验17-18
• 1.2.2 41株碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌ERIC - PCR结果18-19
• 1.2.3 41株CR肠杆菌科细菌不同型别在病区分布情况19-21
• 1.3 讨论21-23
• 1.3.1 41株CRE病原菌、科室分布及标本来源情况21-22
• 1.3.2 41株CRE药敏结果分析22
• 1.3.3 41株CRE同源性检测结果分析22-23
• 1.4 小结23-24
• 二、碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌碳青霉烯酶及β内酰胺酶检测24-37
• 2.1 对象和方法24-28
• 2.1.1 菌株来源与试剂耗材24-25
• 2.1.2 实验方法25-28
• 2.2 结果28-33
• 2.2.1 改良Hodge实验28-29
• 2.2.2 EDTA协同实验29
• 2.2.3 碳青霉烯酶耐药基因检测结果29-30
• 2.2.4 超广谱β内酰胺酶及AmpC酶耐药基因检测结果30-32
• 2.2.5 41株CRE菌株表型确证及耐药基因存在情况32-33
• 2.3 讨论33-35
• 2.3.1 碳青霉烯酶表型确证及基因筛查结果分析34-35
• 2.3.2 ESBLs与AmpC酶耐药基因筛查35
• 2.4 小结35-37
• 三、碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌外膜孔道蛋白分析37-55
• 3.1 对象和方法37-43
• 3.1.1 菌株来源与鉴定37-38
• 3.1.2 主要仪器与试剂耗材38
• 3.1.3 实验流程38-39
• 3.1.4 实验方法39-43
• 3.2 结果43-52
• 3.2.1 外膜蛋白Ompk35及Ompk36基因PCR结果43-44
• 3.2.2 外膜蛋白Ompk35及Ompk36基因DNA序列比对结果44-48
• 3.2.3 外膜蛋白Ompk35及Ompk36基因荧定量PCR结果48-52
• 3.3 讨论52-54
• 3.3.1 外膜蛋白OmpK35及OmpK36 PCR结果分析53
• 3.3.2 外膜蛋白OmpK35及OmpK36 PCR产物测序结果分析53
• 3.3.3 外膜蛋白OmpK35及OmpK36 RT-PCR结果分析53-54
• 3.4 小结54-55
• 结论55-56
• 参考文献56-59
• 发表论文和参加科研情况说明59-60
• 综述 碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌耐药机制研究60-68
• 综述参考文献65-68
• 致谢68-69
• 个人简历69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 刘婧娴;俞静;刘瑛;;产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药基因及流行病学研究进展[J];中国感染与化疗杂志;2015年01期

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本文编号：975279