临床分离泛耐药鲍曼不动杆菌的体内外联合用药研究

发布时间：2017-10-05 14:10

  本文关键词：临床分离泛耐药鲍曼不动杆菌的体内外联合用药研究

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【摘要】：目的通过对安徽地区临床分离鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumanni)进行耐药性分析,了解本地区的菌株分布与耐药现状。采用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)扩增耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(Carbapenem-resistant Acinetobacter baumanni,CRAB)的碳青霉烯酶基因,探究该基因在耐药菌株中的流行特征,为控制耐药菌株的传播提供理论基础,也为临床医务工作者合理应用抗菌药物提供一定的参考。运用棋盘法联合药敏实验(Checkerboard assay)、时间-杀菌实验(Time-kill assay)以及防耐药突变浓度(Mutant prevention concentrations,MPC)测定等方法,探究多粘菌素E(Colistin,COL)分别与磷霉素(FOS)、舒巴坦(SUP)、亚胺培南(IMP)、利福平(RIF)和左氧氟沙星(LVX)联合对泛耐药鲍曼不动杆菌(Extensively drug resistant Acinetobacter baumannii,XDRAB)的体外协同效应;建立鲍曼不动杆菌大蜡螟感染模型(Galleria mellonella infection model),深入探究多粘菌素联合左氧氟沙星的体内作用效果,为寻找新的抗生素治疗策略提供理论依据。材料与方法菌株来源本实验所用的120株鲍曼不动杆菌,全部分离于2012-2013年住院患者的各类临床标本,收集范围为安徽省21家三级甲等医院。其中95株来源于痰标本,12株来源于尿液标本,9株来源于分泌物标本,4株来源于血液标本。药敏实验的质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922。质控菌由安徽省细菌耐药监控中心保存。1.采用美国临床实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standard,CLSI)推荐的MH琼脂倍比稀释法测定临床分离的鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性。2.根据体外药敏结果筛选CRAB,PCR检测包括blaOXA-23-like,blaOXA-24-like,blaOXA-51-like,blaOXA-58-like,blaVIM,blaIMP,blaNDM,blaKPC等基因在内的常见碳青霉烯酶基因的携带情况。3.根据细菌的基因型和表型检测结果,从120株鲍曼不动杆菌中筛选出XDRAB。运用棋盘法联合药敏实验测定COL联合RIF,LVX,IMP,SUP和FOS对XDRAB的最低抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC)。4.以鲍曼不动杆菌ATCC19606为亲本株,体外用含COL的琼脂平板筛选出COL耐药突变株AB19606R,直至COL的MIC128mg/L。5.COL与LVX的体外联合实验对象为4株鲍曼不动杆菌,其中2株为临床株,选自于XDRAB(分别为COL耐药株、COL敏感株);另2株为鲍曼不动杆菌ATCC19606与COL耐药突变株AB19606R。实验方法包括:棋盘法联合药敏实验,时间-杀菌实验,MPC实验,生物膜抑制实验;体内实验运用大蜡螟感染模型,综合评估LVX单药及联用COL时对4株鲍曼不动杆菌的作用效果。方法结果1.研究表明,120株临床分离的鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的均表现出不同程度的耐药性。其中氨曲南(AZM)和头孢曲松(CRO)的敏感性最低,为14.3%和14.7%;IMP,MEN,哌拉西林/他唑巴坦(TZP),阿米卡星(AMK)和环丙沙星(CIP)的敏感率分别为38.9%,31.5%,37.1%,40.4%,33.6%。120株鲍曼不动杆菌中CRAB为70株。2.经检测,70株CRAB中blaOXA-23和blaOXA-51基因全部阳性,并未检测出blaOXA-24,blaOXA-58,blaVIM,blaIMP,blaNDM和blaKPC基因。3.本研究筛选出50株XDRAB进行联合药敏实验。当选定的五种抗生素分别与COL联用时,对部分菌株的抗菌活性明显增强,且通过计算得出的部分抑菌浓度指数(Fractional inhibitory concentration index,FICI)大多低于0.5。COL与五种药物联合展现出不同程度的协同效应,其中COL联合RIF的协同率为92%,联合IMP为88%,联合SUP为72%,联合LVX为64%,联合FOS为50%。4.LVX联用COL对于COL敏感的临床株有明显的协同杀菌效应;MPC试验中,两株COL敏感株(ATCC196906和临床敏感株)的COL MPC为128mg/L和256mg/L,而联用2mg/L的LVX之后,COL的MPC值均下降到16mg/L;抑制突变选择指数(Mutation prevention index,MPI)分别比COL单药时下降了8倍以上和16倍以上。体内实验中,LVX与COL联用时,幼虫的生存率明显高于单独用药的存活率。结论1.鲍曼不动杆菌已成为安徽地区院内感染的重要病原菌,近年来不断增长的感染率以及多重耐药甚至广泛耐药和全耐药菌株的出现,在很大程度上限制了临床治疗。2.本实验中收集的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌中,较流行的的碳青霉烯酶基因型为blaOXA-23和blaOXA-51。3.多粘菌素是泛耐药鲍曼不动杆菌感染的最后治疗选择。到目前为止,大多数泛耐药菌仍对多粘菌素保持着较高的敏感性,但国内外已有多粘菌素耐药株以及多粘菌素异质性耐药现象报道。考虑到单独用药的限制性,以多粘菌素为基础的多种抗菌药物联合可成为临床医生治疗鲍曼不动杆菌感染的替代方法。
【关键词】：鲍曼不动杆菌 碳青霉烯酶基因 多粘菌素 联合用药 大蜡螟
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R446.5
【目录】：

• 中英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 第一部分 临床分离鲍曼不动杆菌的基因检测与耐药性分析14-29
• 前言14-15
• 材料与方法15-21
• 结果21-23
• 讨论23-25
• 结论25-26
• 参考文献26-29
• 第二部分 泛耐药鲍曼不动杆菌联合用药的体内外研究29-57
• 前言29-30
• 材料与方法30-37
• 结果37-48
• 讨论48-51
• 结论51-52
• 参考文献52-57
• 附录57-59
• 致谢59-60
• 综述60-74
• 参考文献67-74

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本文编号：977218