马铃薯疮痂病的分离和检测体系构建

发布时间：2020-04-30 03:10

【摘要】：马铃薯是继水稻、小麦和玉米之后的世界第四大粮食作物,也是我国农民增收的重要途径和粮食安全的重要保障。马铃薯疮痂病是链霉菌引起的一种表皮性病害,多发生在北方,近年来,疮痂病在我国一些南方马铃薯产区也频繁发生,严重影响块茎的外观品质。本研究收集了广东和湖北两省的疮痂病块茎,进行了疮痂病的分离鉴定,在此基础上建立了疮痂病的相关检测体系,为疮痂病的防控奠定了基础,主要结果如下:1.收集了广东、湖北两省五个地区的疮痂病块茎102个,观察分析了它们的症状类型,及在培养基上链霉菌的培养特征,孢子链形态,并从湖北襄阳的疮痂症状块茎中分离得到XY-12菌株;2.通过表型和显微观察、16S rDNA测序,初步鉴定襄阳疮痂病分离菌株XY-12为Streptomyces bottropensis,进一步的盆栽接种鉴定表明,该分离菌株在接种浓度1.68×10~3 CFU/mL以上能够导致马铃薯中薯5号产生疮痂病症状;3.在收集Streptomyces scabies、S.acidiscabies、S.bottropensis、S.stelliscabiei、S.europeascabiei五种致病菌的66条txtA基因序列的基础上,设计了txtA的特异PCR引物CS-67s/379a,并对退火温度以及模板、引物浓度进行了优化;通过对田间样品的检测,表明该方法能特异检测疮痂病,能够灵敏的检测到10~(-6) ng疮痂病菌的DNA;4.进一步基于txtA基因设计了5对RPA引物,经检测效果良好,选取其中的一对引物CS-RPA126s/395a分别进行PCR和RPA分析,RPA能够检测10~(-4)ng疮痂病DNA,低于PCR的灵敏度10倍,但RPA技术可以不依赖复杂的仪器就实现等温扩增,且与PCR引物CS-67s/379a的检测结果有高度的一致性。
【图文】：

将各地的病薯采集后发现,不同地区疮痴病薯的症状有很大差异,同区的病薯症状变化也较大，具有凹陷型、凸起型和平状疮痂中的其中两种症状。如图 3.1（下页），1-4 号分别为广东惠东地区（稔山、铁涌、平海）及广东市块茎样品，其主要有平状和凹陷型疮痂；5-8 号为湖北武汉华中农业大学马铃验基地收集的块茎样品，其主要有凸起和平状疮痂；9-12 号为湖北襄阳地区块品，其主要有凹陷和平状疮痂；13-16 号为湖北云梦地区块茎样品，其主要有凹平状疮痂。图 3.2 展示了不同的马铃薯疮痂病症状的细节图，由图可以看到，病斑形状角星状（图 3.2-2，3.2-3）、椭圆形（图 3.2-6）、不规则形（图 3.2-4，3.2-5斑面积大小差异较大，有的单个病斑面积小且密集（图 3.2-1，3.2-6），有的面且连成一片（图 3.2-2，3.2-4，3.2-5）、凹陷深度差异较大，有凹陷较大（图 3.2-入块茎内部、有的在表层（图 3.2-1，3.2-6）不深入块茎内部。说明马铃薯疮痂症状表现多样。

15图 3.1 不同地区马铃薯疮痴病的症状Fig.3.1 The symptoms of potato scab from different areas in China广东病薯(1-4)，湖北华农病薯(5-8)，湖北襄阳病薯(9-12)，，湖北云梦病薯(13-16)tuber from Guangdong province(1-4); tuber from HZAU(5-8);tuber from Xiangyang of Hubeiprovince(9-12);tuber from Yunmeng of Hubei province(13-16)
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S435.32

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本文编号：2645323