稻瘟菌核糖体蛋白L21（Rpl21）的生物功能分析
发布时间：2020-08-08 17:05
【摘要】：由稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)引起的稻瘟病(Rice blast)是水稻上的主要病害之一,每年会给水稻生产造成巨大经济损失。稻瘟菌作为一种模式病原真菌,人们对其生长循环、发病规律以及流行特征都有比较清楚的了解。通过这些特征,人们可以在分子水平上对稻瘟病开发新的防控策略。在前期研究中表明,稻瘟菌ATP依赖型Lon蛋白酶(MAP1)可能通过调控互作蛋白进而调控稻瘟菌的致病性。因此探究MAP1互作蛋白的功能和作用对于揭示稻瘟菌致病过程具有重要意义。Rpl21(Ribosomal Protein L21)就是和MAP1互作的蛋白之一。通过农杆菌介导的遗传转化方法对该基因进行敲除,获得了其敲除突变体△rpl21.为了进行基因的定位,我们也成功获得了亚细胞定位突变体,结果发现目的基因定位在细胞膜或线粒体上。通过对野生型和突变体生物学表型进行分析,发现突变体对SDS更为敏感,分生孢子梗变长,孢子量增多,孢子萌发提前,附着胞生成率增多,对水稻的致病力增强,在水稻叶鞘菌丝扩展的更广。通过原核表达和蛋白纯化技术,我们得到了目的蛋白。将蛋白注射烟草叶片中,烟草叶片发生了过敏性坏死反应。经过以上的研究证明,RPL21基因在调控稻瘟菌的菌丝生长,分生孢子的形成致病性的生物学性状方面起着重要的作用。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S435.111.41
【图文】：
第 1 章 文献综述顶端便会开始膨大形成附着胞。附着胞成熟后会有黑色素沉积[17,18]，黑色素允许水分子自由通过但是会阻止生物大分子通过，这使得附着胞拥有巨大的膨压[19]。之后附着胞产生侵染钉，巨大的膨压使侵染钉侵入水稻叶片[20-22]。侵染钉侵入细胞后开始形成菌丝，菌丝在细胞内扩展，形成病斑。大量的分生孢子会再从病斑处释放出来，再次去侵染周边的水稻[23]。到秋冬季节，稻瘟菌以分生孢子或者菌丝体的形式在病稻草、谷粒上过冬，第二天称为水稻的初侵染源[24]。
图 1.2 核糖体结构Fig 1.2 Ribosome structure白的分类与功能中，核糖体蛋白质含有 40S 小亚基和 60S 大亚包括 L1-L49[63,64]。核糖体可以促进 rRNA 的折蛋白质的合成效率。核糖体不仅能参与蛋白质细胞的分裂增殖和凋亡都离不开核糖体的调节致细胞代谢失常、细胞生长停滞甚至死亡[69]。白 L21 L21（Ribosomal Protein L21，Rpl21）是核糖0,71]。迄今为止，多种生物的 RPL21 基因得以克
2、向 2mL EP 管的中央先后两次加入 PEG 转化液（60%PEG4000 和 KTC比例为 2:1）500μL，注意混匀。3、置于 28℃培养箱中 30min。4、将 200μL 混合培养液用微量移液器转移至无任何抗生素的固体 TB3 平板中，用涂布棒轻轻地滑动使整个平板被混合液铺满即可，晾干，然后将平板放置于 28℃中过夜。5、再倒入薄薄的一层含 200μg/mL 潮霉素，400μg/mL 头孢霉素的固体 TB3培养基，凝固后将其置于28℃恒温培养箱中黑暗培养。挑取 TB3 上层培养基的转化子于含 200μg /mL 潮霉素的 PDA 培养，PCR验证抗潮霉素的菌株 DNA。2.2.8 构建 RPL21 敲除载体和互补载体2.2.8.1 构建 RPL21 敲除载体
本文编号：2785850
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S435.111.41
【图文】：
第 1 章 文献综述顶端便会开始膨大形成附着胞。附着胞成熟后会有黑色素沉积[17,18]，黑色素允许水分子自由通过但是会阻止生物大分子通过，这使得附着胞拥有巨大的膨压[19]。之后附着胞产生侵染钉，巨大的膨压使侵染钉侵入水稻叶片[20-22]。侵染钉侵入细胞后开始形成菌丝，菌丝在细胞内扩展，形成病斑。大量的分生孢子会再从病斑处释放出来，再次去侵染周边的水稻[23]。到秋冬季节，稻瘟菌以分生孢子或者菌丝体的形式在病稻草、谷粒上过冬，第二天称为水稻的初侵染源[24]。
图 1.2 核糖体结构Fig 1.2 Ribosome structure白的分类与功能中，核糖体蛋白质含有 40S 小亚基和 60S 大亚包括 L1-L49[63,64]。核糖体可以促进 rRNA 的折蛋白质的合成效率。核糖体不仅能参与蛋白质细胞的分裂增殖和凋亡都离不开核糖体的调节致细胞代谢失常、细胞生长停滞甚至死亡[69]。白 L21 L21（Ribosomal Protein L21，Rpl21）是核糖0,71]。迄今为止，多种生物的 RPL21 基因得以克
2、向 2mL EP 管的中央先后两次加入 PEG 转化液（60%PEG4000 和 KTC比例为 2:1）500μL，注意混匀。3、置于 28℃培养箱中 30min。4、将 200μL 混合培养液用微量移液器转移至无任何抗生素的固体 TB3 平板中，用涂布棒轻轻地滑动使整个平板被混合液铺满即可，晾干，然后将平板放置于 28℃中过夜。5、再倒入薄薄的一层含 200μg/mL 潮霉素，400μg/mL 头孢霉素的固体 TB3培养基，凝固后将其置于28℃恒温培养箱中黑暗培养。挑取 TB3 上层培养基的转化子于含 200μg /mL 潮霉素的 PDA 培养，PCR验证抗潮霉素的菌株 DNA。2.2.8 构建 RPL21 敲除载体和互补载体2.2.8.1 构建 RPL21 敲除载体
【参考文献】
相关期刊论文 前2条
1 李宏宇,鲁国东,王明海,王宗华;稻瘟病菌微波诱发突变体的分析[J];菌物系统;2003年04期
2 周益军,范永坚,吴淑华,陆振晓,程兆榜;稻瘟病菌生理小种离体接种鉴定和致病性人工诱变研究[J];江苏农业研究;1999年01期
相关博士学位论文 前1条
1 李健;线粒体ATP-Lon蛋白酶（MAP1）参与稻瘟菌致病和自身防护的分子证据[D];吉林大学;2013年
相关硕士学位论文 前2条
1 李前前;稻瘟菌候选效应蛋白的鉴定及功能初探[D];扬州大学;2015年
2 李雪松;粟酒裂殖酵母核糖体蛋白L32-1和L32-2功能的初步研究[D];南京师范大学;2013年
本文编号：2785850
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