水稻新致病菌Pantoea ananatis的分离鉴定

发布时间：2020-08-13 18:13

【摘要】：水稻作为我国主要粮食作物与人民生活息息相关,全国种植水稻的地区分布广泛。东北地区土地肥沃,夏季温度适宜,光照充足,近年来一直作为我国优质水稻的主要产区。水稻种植生产中往往伴随有多种病虫害的发生,水稻产量不可避免受到一定影响。针对常见水稻病害,培育和推广种植水稻抗病品种是病害综合防治的主要手段,但这样可能会引发一些新型病害。近年来国外有多个地区发现泛菌属细菌引起的水稻病害,国内也有泛菌属细菌引起水稻穗部病害的报道。本文于2016和2017年在辽宁丹东和吉林公主岭、拉溪地区发现一种水稻叶部病害,田间初步观察其病状与由Xoo引起的水稻白叶枯病症状相似,病斑沿叶边缘扩展,失水干枯。通过对采集的发病叶片进行病原物分离和鉴定、以及致病性测定试验,确定了该病害是由一种由菠萝泛菌引起的水稻叶部病害。此外,本研究对引起该病的菠萝泛菌的生物学特性进行分析,并初步探究该细菌侵染与水稻的互作关系,具体研究结果如下:1.本文从水稻田间采集代表性发病叶片,采用稀释分离法从发病叶片上共分离获得到43个代表性菌株。通过对细菌分离物的生理生化试验、16S rDNA和gyrB基因的序列分析,28株细菌鉴定为泛菌属,其中菠萝泛菌19株,该细菌在每个地区的水稻病叶中都能分离到。将分离的43株细菌分离物接种烟草叶片,结果表明,所有菠萝泛菌和成团泛菌都能造成烟草过敏反应。选取来源于不同地区的6株菠萝泛菌和4株成团泛菌,采用剪叶法将其接种水稻叶片,其中4株菠萝泛菌能够引起水稻叶片枯萎症状,从人工接种的发病稻叶上仍能分离获得菠萝泛菌,完成柯赫氏法则验证,确定菠萝泛菌为该水稻叶部病害的致病因子,这是国内首次报道由菠萝泛菌引起的水稻叶部病害。2.菠萝泛菌能够侵染水稻、玉米等多种寄主植物,但有关菠萝泛菌的生物学特性尚无具体研究,本文测试了不同条件包括温度、pH、盐浓度对菠萝泛菌生长的影响。结果发现,菠萝泛菌的最适温度为28-32℃,温度过高或过低都会减缓细菌的生长速度,53℃为该细菌的致死温度;该细菌适宜在pH值为5.7-7.4的中性及弱酸性条件下生长,pH高于8.2的弱碱性条件下生长速度迟缓,强酸强碱条件下无法生长;该细菌在盐浓度为1-3%的环境下生长速度较快,盐浓度越高生长速度越低,在盐浓度高于9%环境下无法生长。在Kan、Amp、Gm、Cep常用抗生素平板上都无法生长。3.为探究菠萝泛菌侵染与水稻的互作关系,采用剪叶法将该细菌接种水稻植株叶片,接种后分别在0、12、24、48、72h采集水稻叶片,使用Trizol法提取RNA,通过qRT-PCR检测不同采集时间点防卫基因(RR1b和RR5)的相对表达量。结果表明,接种24 h后,RR1b和RR5基因的相对表达量逐渐升高;接种72 h时,RR1b基因表达量上调18倍,RR5基因表达量上调23倍,PAL基因变化趋势不明朗。这表明该细菌侵染水稻叶片后能诱导调控防卫基因的表达。
【学位授予单位】：安徽农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S435.11
【图文】：

4.1 病原菌分离鉴定4.1.1 菌株分离结果实验依据病样采集的不同时间与地区以及平板稀释后细菌单菌落生长性状对菌株进行初步分类，共分离保存了 43 个菌株。其中，2016 年在辽宁丹东采集的病样中，分离保存了12个菌株；在吉林公主岭采集的病样中分离到12个菌株。2017 年在辽宁丹东采集的病样中，分离保存了 11 个菌株；在吉林拉溪采集的病样中分离到 10 个菌株。从两年菌株分离整体来看，菌株颜色分为黄、白和介于二者之间的颜色三种，保种命名时用 Y（Yellow）、W（White）和 M（Middle）来标注，M 菌株在每个地区分离的菌株中都是优势种，数量极大而且生长速度较快。白色菌株从形态上可分为两种，一种是白色半透明，菌落形状不固定，边缘不光滑，成扩散状，另一种为乳白色，菌落成圆形，体积较小，表面光滑，长期培养会逐渐变黄色。A B C

表 4-4 生化反应结果Table 4-4 Biochemical reaction result17 18 22 25 27 28 29吲哚实验 - - - - - - -硝酸盐实验 + - + + + + +吲哚产生 + -柠檬酸盐利用 + +β-半乳糖苷酶 + +产酸:甘油 - -D-阿拉伯糖 + +山梨醇 - -纤维二糖 + +乳糖 - -麦芽糖 + +七叶灵水解+ + +运动性 + +丙二酸盐利用 - -苯丙氨酸脱氨酶 - -

吉林拉溪 Enterobacter sp.吉林拉溪 Pantoea ananatis 辽宁丹东王家坨子 Pantoea ananatis吉林拉溪 Pantoea ananatis2 浅黄 辽宁丹东 Microbacterium par2 橘黄 辽宁丹东 Microbacterium arb 吉林拉溪 Microbacterium arb辽宁丹东小甸子 Pseudomonas putid应结果natis 和 Pantoea agglomerans 实验结果为阳性且这两可能是该病害的致病菌。Erwinia aphidicola、Pseudom 实验结果为阴性，并且只在少数叶片上分离获得，可

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 李淑菊;王惠哲;;黄瓜褐斑病的发生、识别及防治[J];天津农业科学;2007年02期

2 张贺;张欣;漆艳香;蒲金基;吕延超;谢艺贤;;一种由角斑梨孢菌引起的香蕉叶斑病[J];热带生物学报;2010年02期

3 姜景魁;张绍升;廖廷武;;猕猴桃黄腐病的研究[J];中国果树;2007年06期

4 林惠梅;江绍琳;蒋军喜;;苦瓜炭疽病病原菌鉴定[J];江西植保;2007年04期

5 楼兵干,楼晓明,杨合同;郁金香种球腐烂病的病原鉴定[J];浙江农业学报;2003年05期

6 陈德芬,赵国防,肖菲,张小琨,史鹏,刘峄,杨焕婷;晚香玉叶斑病病原物鉴定[J];天津农学院学报;2005年03期

7 段春芳;黄贵修;郭容琦;沈绍斌;张林辉;娄予强;刘光华;;云南胡椒炭疽病病原鉴定[J];江西农业学报;2012年11期

8 于舒怡;傅俊范;周如军;刘博;严雪瑞;;辽宁省白头翁叶斑病发生初报[J];植物保护;2008年02期

9 蔡学清;黄月英;杨建珍;陈军;蔡国隆;胡方平;;福建省西瓜细菌性果斑病的病原鉴定[J];福建农业大学学报;2005年04期

10 谭道朝;王凯学;王华生;袁高庆;王忠文;;广西番茄细菌性斑疹病病原鉴定及其症状识别[J];中国植保导刊;2013年12期

相关会议论文 前10条

1 李淑菊;王惠哲;;黄瓜褐斑病的发生、识别及防治[A];纪念天津科润黄瓜研究所建所二十五周年论文摘要集（2001—2010）[C];2010年

2 番华彩;杨佩文;郭志祥;曾莉;;一种由多主棒孢引起的香蕉叶斑病[A];中国植物病理学会2011年学术年会论文集[C];2011年

3 张梦雅;张林;闫红飞;刘大群;;麻山药上一种新病害病原初探[A];中国植物病理学会2016年学术年会论文集[C];2016年

4 刘随存;刘贤谦;高洁;;枣缩果病病原菌的分离与鉴定[A];第二届中国林业学术大会——S5 森林病害及其防治论文集[C];2009年

5 王晓丽;夏花;朱宏建;高必达;;朝鲜蓟上一种萎蔫病的病原分离与鉴定[A];粮食安全与植保科技创新[C];2009年

6 马元伟;马康;王守现;赵爽;王兰青;刘宇;许峰;;一株刺芹侧耳软腐病致病菌新种的分离与鉴定[A];第十届全国食用菌学术研讨会论文汇编[C];2014年

7 龙月娟;毛忠顺;朱书生;陈中坚;魏富刚;杨敏;朱有勇;何霞红;;三七顶枯病的病原菌[A];中国植物病理学会2015年学术年会论文集[C];2015年

8 李伶俐;韩正敏;吕明亮;应国华;;苏北地区杨树枯萎病病原菌的鉴定[A];江苏省植物病理学会第十一次会员代表大会暨学术研讨会论文集[C];2008年

9 霍鹏升;纪兆林;强静雅;王晨冰;童蕴慧;王发林;徐敬友;;桃红黑点病病原初步鉴定及其药剂筛选[A];2014年中国植物保护学会学术年会论文集[C];2014年

10 席中刚;刘浩;郑露;黄俊斌;;黄连叶斑病病原鉴定及其生物学特性[A];中国植物病理学会2016年学术年会论文集[C];2016年

相关重要报纸文章 前1条

1 刘沛国　谭强;较 量[N];中国国门时报;2010年

相关硕士学位论文 前4条

1 王琦;水稻新致病菌Pantoea ananatis的分离鉴定[D];安徽农业大学;2018年

2 曾璐;湘莲腐败病病原菌分离鉴定及其防治研究[D];湖南农业大学;2013年

3 张海颖;我国北方马铃薯疮痂病菌组成分析与致病菌株分子检测[D];河北农业大学;2014年

4 刘伯;马铃薯疮痂病新致病种的鉴定及其毒素合成基因分析[D];河北农业大学;2010年

本文编号：2792345