蜂蜜中木藜芦烷类毒素及托品烷类生物碱液相色谱串联质谱检测方法的研究
发布时间：2020-09-28 21:53
蜂蜜作为天然的甜味食品,素有“天然抗生素”的美誉,然而近年来南方地区频发的蜂蜜中毒事件,引起了广大消费者的恐慌,成为食品安全问题中亟待解决的突出问题。黄杜鹃和曼陀罗等有毒蜜源植物在我国分布广泛,在大宗蜜源植物流蜜匮乏时,蜜蜂易于采集其花蜜,并将有害物质转移并富集到蜂蜜中,形成有毒蜂蜜。木藜芦烷类毒素和托品烷类生物碱分别作为杜鹃和曼陀罗中主要毒性成分,误食微量便可导致人的中毒反应,严重者甚至导致死亡。鉴于此,本研究基于超高效液相色谱串联质谱开发了蜂蜜中的木藜芦烷类毒素及托品烷类生物碱的准确定量分析方法并进行系统的方法学验证。旨在及时有效的规避有毒蜂蜜误食的风险,保护消费者的安全,为蜂产品质量安全及风险评估等提供技术支持。本研究主要分为两个部分,第一部分建立了蜂蜜中4种木藜芦烷类毒素(闹羊花毒素II、闹羊花毒素III、木藜芦毒素I和木藜芦毒素III)的UHPLC-MS/MS检测方法,采用甲醇/水(20:80,v/v,含0.1%乙酸)作为提取液,0.1%乙酸-水和0.1%乙酸-甲醇作为流动相进行梯度洗脱。该方法的检测限为2.0μg/kg~5.0μg/kg,定量限为5.0μg/kg~10.0μg/kg。在5.0~50.0μg/kg添加浓度范围内,4种木藜芦烷类毒素的平均回收率为77.94%~109.21%,日内变异系数为4.06%~9.82%,日间变异系数为4.94%~13.11%,并采用开发的方法对我国各地17种蜂蜜品种进行木藜芦烷类毒素检测分析,结果表明我国部分蜂蜜中存在木藜芦烷类毒素污染的风险,其污染的蜜种主要集中在杜鹃蜂蜜、杂花蜂蜜以及部分野生蜂蜜中。然而,我国大宗商品蜜中未检出该类污染物,较为安全。第二部分,本研究首先采用UHPLC-Q Exactive Plus高分辨质谱技术对曼陀罗花蜜中的托品烷类生物碱进行识别与鉴定,共得到4种托品烷类生物碱,即茛菪碱、东茛菪碱、山茛菪碱、去甲基山茛菪碱。为明确曼陀罗花蜜中的托品烷类生物碱是否通过蜜蜂的采集行为转移至蜂蜜中形成有毒蜂蜜,本研究采用液相色谱串联高分辨质谱对蜂蜜中的托品烷类生物碱进行检测分析,结果表明疑似阳性蜂蜜样本中存在与曼陀罗花蜜中一致的4种托品烷类生物碱,其中东茛菪碱约占85.0%以上。为了探究我国蜂蜜中托品烷类生物碱污染的含量,本试验开发了蜂蜜中4种托品烷类生物碱的UHPLC-MS/MS定量检测方法。采用0.1%甲酸-水和0.1%甲酸-乙腈作为流动相,甲醇/水(20:80,v/v)作为提取液,得到该方法的检测限为0.05μg/kg,定量限为0.1μg/kg。在0.1~0.5μg/kg添加浓度范围内,平均回收率为74.93%~103.42%,日内变异系数为2.63%~10.81%,日间变异系数为3.78%~14.13%。
【学位单位】：烟台大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S896.1;O657.63
【部分图文】：
烟台大学硕士学位论文本试验实际样品的检测中，待测的 17 种蜂蜜中共有 7 种蜂蜜存在不同程度的木藜芦烷类毒素污染，即杜鹃蜂蜜，野生蜂蜜、杂花蜜、雪脂莲蜜、柑橘蜜、石榴蜜和油菜蜜，其中杜鹃蜂蜜中木藜芦烷类毒素含量最高，闹羊花毒素 II 达 661.5 μg/kg，闹羊花毒素达 III 885.3 μg/kg，木藜芦毒素 I 达 548.6 μg/kg，木藜芦毒素 III 达 796.4μg/kg。另外，受检的大宗商品蜜如荆条蜜、椴树蜜、洋槐蜜、枸杞蜜和枣花蜜中均未检出该类毒素，尚未发现木藜芦毒素威胁，较为安全，如图 2-2 所示。
烟台大学硕士学位论文2.3.3 样品前处理的优化蜂蜜基质较为黏稠，含糖量较高，当有机溶剂比例较高时则不易完全溶解，因此最终采用 20%的有机溶剂进行提取。文献报道，酸化的有机溶剂有利于木藜芦烷类毒素的提取，因此本文对甲醇/水（20:80，v/v）、乙腈/水（20:80，v/v）、乙酸乙酯/水(20:80，v/v)、甲醇/水 (20:80，v/v，含 0.1%乙酸)、甲醇/水 (20:80，v/v，含 0.1%甲酸)等 5 种提取剂进行了测试，回收率如图 2-5 所示。甲醇/水 (20:80，v/v，含 0.1%乙酸)作为提取剂时，目标化合物表现出良好的回收率，目标物的平均回收率范围为80.1~102.5，而乙酸乙酯的共萃取物较多，具有较强的基质效应，回收率也相对较低。因此最终选择甲醇/水 (20:80，v/v，含 0.1%乙酸)作为提取溶液。由于低温可以有效的促进糖和其他杂质的沉淀，因此提取结束后采用低温高速离心进行净化，降低基质效应，进而提高灵敏度。
40图 3-3 4 种托品烷类生物碱二级碎片离子质谱图Fig.3-3 Fragment ion mass spectrum of 4 tropane alkaloids.
本文编号：2829327
【学位单位】：烟台大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S896.1;O657.63
【部分图文】：
烟台大学硕士学位论文本试验实际样品的检测中，待测的 17 种蜂蜜中共有 7 种蜂蜜存在不同程度的木藜芦烷类毒素污染，即杜鹃蜂蜜，野生蜂蜜、杂花蜜、雪脂莲蜜、柑橘蜜、石榴蜜和油菜蜜，其中杜鹃蜂蜜中木藜芦烷类毒素含量最高，闹羊花毒素 II 达 661.5 μg/kg，闹羊花毒素达 III 885.3 μg/kg，木藜芦毒素 I 达 548.6 μg/kg，木藜芦毒素 III 达 796.4μg/kg。另外，受检的大宗商品蜜如荆条蜜、椴树蜜、洋槐蜜、枸杞蜜和枣花蜜中均未检出该类毒素，尚未发现木藜芦毒素威胁，较为安全，如图 2-2 所示。
烟台大学硕士学位论文2.3.3 样品前处理的优化蜂蜜基质较为黏稠，含糖量较高，当有机溶剂比例较高时则不易完全溶解，因此最终采用 20%的有机溶剂进行提取。文献报道，酸化的有机溶剂有利于木藜芦烷类毒素的提取，因此本文对甲醇/水（20:80，v/v）、乙腈/水（20:80，v/v）、乙酸乙酯/水(20:80，v/v)、甲醇/水 (20:80，v/v，含 0.1%乙酸)、甲醇/水 (20:80，v/v，含 0.1%甲酸)等 5 种提取剂进行了测试，回收率如图 2-5 所示。甲醇/水 (20:80，v/v，含 0.1%乙酸)作为提取剂时，目标化合物表现出良好的回收率，目标物的平均回收率范围为80.1~102.5，而乙酸乙酯的共萃取物较多，具有较强的基质效应，回收率也相对较低。因此最终选择甲醇/水 (20:80，v/v，含 0.1%乙酸)作为提取溶液。由于低温可以有效的促进糖和其他杂质的沉淀，因此提取结束后采用低温高速离心进行净化，降低基质效应，进而提高灵敏度。
40图 3-3 4 种托品烷类生物碱二级碎片离子质谱图Fig.3-3 Fragment ion mass spectrum of 4 tropane alkaloids.
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本文编号：2829327
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