桃细菌性穿孔病菌遗传多样性、病害发生规律和防治研究

发布时间：2020-10-12 06:29

　　 桃细菌性穿孔病(peach bacterial shot hole)是危害桃树的一种重要病害,严重影响桃产业的健康和可持续发展。为了有效地控制该病害,本文对其病菌遗传多样性、病害消长规律以及药剂筛选与田间防治等方面进行了研究。采集我国桃主产区的桃细菌性穿孔病病叶、病果和病枝,通过分离和纯化,获得分离物。经菌落特征、生理生化特性和16S-23SrDNAITS序列分析,51株分离物鉴定为Xanthomonas arboricolapv.runi,即树生黄单胞李致病变种。使用Rep-PCR和ISSR-PCR方法对51株分离物进行聚类分析,发现分离株间具有同源性,也存在一定的多样性,其多样性与不同地理来源具有一定程度的相关性。绝大多数分离株都能在桃叶片、果实上引起症状,在非寄主烟草上引起过敏性坏死反应,但分离株间致病反应类型和强弱存在一定的差异。在江苏无锡市阳山镇寺前村桃园基地连续两年的病情动态调查表明,桃细菌性穿孔病一般在4月底5月初出现病叶,6月至8月病情快速上升,之后趋于饱和。结合天气情况分析发现,桃细菌性穿孔病的发生严重程度与湿度、温度尤其是降雨量密切相关,即愈是高温高湿的天气病害发生愈是严重,愈是降雨量大的天气愈有利于病菌的传播,而干旱少雨的高温天气不利于病害流行和蔓延。采用抑菌圈法室内测定了 7种生物杀菌剂和11种化学杀菌剂对桃细菌性穿孔病菌的毒力,筛选出高效药剂,生物农药梧宁霉素、农用硫酸链霉素和中生菌素对病菌都有较强的抑制效果,EC5o值分别为0.0651 μg/mL、0.0698 μg/mL和1.2422 μg/mL;化学杀菌剂中氯溴异氰尿酸对桃细菌性穿孔病菌的抑菌能力最强,EC5o值为0.0559 μg/mL,其次是噻唑锌、溴菌腈、噻霉酮和喹啉铜。田间防治试验表明,在江苏无锡异菌脲、噻唑锌对细菌性穿孔病的防效较好,在辽宁大连喹啉铜、农用硫酸链霉素和噻唑锌的防效较好,而在福建福州农用硫酸链霉素的防效最好,其次是中生菌素,不同产区试验地间药剂防效存在差异。
【学位单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S436.621.1
【部分图文】：

采集病枝病叶病果分离时，用病部溢出液在ＮＡ平板上划线，２８°Ｃ培养Ｉｄ后，沿着??划线轨迹会长出黄色湿润粘稠的菌体；然后从分离平板上继续挑取单菌落划线，纯化４？５??次，得到淡黄色、湿润、粘稠、饱满的菌体菌落（如图２）。???图２部分分离株平板菌落形态??

接成片、干枯脱落，甚至导致叶片脱落；而在枝条上，会形成紫褐色的病斑；在桃果实上，??初期会形成圆形褐色小病斑，病斑周围有黄绿色晕圈，后期严重时病斑会连接成片、开裂，??同时病斑部位会凹陷，形成花脸状病斑（图１）。??Ｄ??＿丨｜丨丨｜＿丨丨｜１丨丨丨丨１丨丨＿？??詹级着??图１桃细菌性穿孔病症状??Ａ－Ｃ：桃叶上的褐色病斑；Ｄ－Ｆ：桃枝条上的褐色病斑；Ｇ－Ｉ：桃果实上的花脸病斑。??采集病枝病叶病果分离时，用病部溢出液在ＮＡ平板上划线，２８°Ｃ培养Ｉｄ后，沿着??划线轨迹会长出黄色湿润粘稠的菌体；然后从分离平板上继续挑取单菌落划线，纯化４？５??次，得到淡黄色、湿润、粘稠、饱满的菌体菌落（如图２）。???图２部分分离株平板菌落形态??

以Ｚａｐ细菌ｇＤＮＡ为模板，用ＢＯＸ引物进行ＰＣＲ反应，发现扩增的片段大小主要在??１０００?ｂｐ？２３００?ｂｐ，有５个指纹位点，共有４种指纹谱型，其中，最多一种指纹谱型出现４３??次。对５１株分离株ＵＰＧＭＡ聚类分析表明（图５），在相似水平为０．８时，供试的５１个??菌株大体可以聚为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ四簇。其中，大部分分离株聚类在Ａ簇，有４３个菌株，??包括来自辽宁２７个、浙江６个、江苏６个，广西４个；Ｂ族中仅有１个，来自辽宁；Ｃ簇??中有１个辽宁，２个浙江的分离株；Ｄ簇有１个浙江，１个江苏，２个辽宁的分离株。??Ｉ：］??９－３??？－５??５１４??１９－；??Ａ?１?朴??ｉｌＪｉ??１５ｆｃ??１１１：??ｉ?ｕ－ｉ??■??ｉ§??ｊｉＣｆｃ??ａ??Ｉ０ｃ??？．．１０??—￣Ｂ?匕???ｃ?ｉ！＾??！??＇ｌ？．２???ｄ?ｉｌ〇ｉ??ｒ－，—，……「????Ｉｓ??Ｉ?＇?＇?＇?Ｉ?＇?＇?＇?＇?１?＇?＇?＇?＇?Ｔ?１?＇?＇?＇?Ｉ??０＊２?ＯＳ＇?ｆｌ７１?ＯＭ?１００??图５?５１株分离株的ＢＯＸ－ＰＣＲ聚类分析图??
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本文编号：2837785