十字花科根肿病菌单孢分离体系的建立及生理小种鉴定

发布时间：2020-10-23 07:09

　　 由芸薹根肿菌(Plasmdiophora brassicae Woron.)侵染引起的根肿病(Clubroot disease)是十字花科蔬菜生产上一种难以防治的毁灭性世界病害,主要原因之一是根肿菌具有遗传多样性,导致生理小种的分化。明确芸薹根肿菌生理小种种类及地理分布,对根肿菌生理小种的分化监测及抗病育种工作具有重要意义。本论文旨在建立一套简便稳定、适应性广的芸薹根肿菌单孢分离体系,对我国不同地区芸薹根肿菌进行单孢分离,采用Williams鉴别系统,对获得的芸薹根肿菌单孢系菌株进行生理小种鉴定。主要结果如下:1.建立了一套简便稳定、植株成活率高、发病率高、适应性广的芸薹根肿菌单孢分离体系。通过对琼脂块法进行改进,用琼脂糖凝层代替常规琼脂块,解决了琼脂块法含杂质较多,不易区分单孢的问题,确定了芸薹根肿菌单孢分离的最佳琼脂糖凝层浓度为1.3%;明确了单孢接种的最佳苗龄为大白菜感病品种‘菊心’在81孔盒催芽24 h,接种后最佳培养条件为暗培养24h。采用本文建立的琼脂糖凝层法和已报道的液滴法、琼脂块法3种单孢分离方法进行单孢分离方法比较,表明琼脂糖凝层法为最佳单孢分离方法,接种后菊心大白菜发病率为17.45%,发病率明显高于液滴法和琼脂块法。2.利用建立的琼脂糖凝层法对我国20个不同采集地区根肿菌菌样进行单孢分离,分离得到芸薹根肿菌单孢系菌株275株,扩繁并保存单孢系菌株205株。3.明确了我国8个地区芸薹根肿菌单孢系菌株生理小种的种类及地理分布。采用Williams鉴别系统,对获得的40株单孢系菌株进行生理小种鉴定。鉴定出2号、4号、5号、6号、7号、8号、9号、10号、12号和14号等10个不同的生理小种种类。其中4号为优势小种,所在样品菌株中出现的频率为42.5%;其次共有9株单孢系为生理小种5号,所在样品菌株中出现的频率为22.5%。湖北宜昌、重庆武隆、云南昆明和四川广元等4个高原地区的优势小种为生理小种4号;山东青岛、河南新野和北京顺义等3个平原、丘陵地区单孢系小种频率较高的为生理小种4号和5号,对鉴别寄主的感染力和扩繁能力整体较弱。通过本论文的研究,建立了一套简便稳定的芸薹根肿菌单孢分离体系,明确了我国8个地区芸薹根肿菌生理小种种类和地理分布,为选育十字花科蔬菜抗根肿病品种、有效控制根肿病的蔓延提供了理论依据。
【学位单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S436.3
【部分图文】：

图 2-1 十字花科根肿病的分级标准Fig.2-1 The classification of cruciferous clubroot disease肿病分级标准从左到右依次为 0 级，1 级，2 级，3 级，4 级。lubroot disease in the figure are 0, 1, 2, 3 and 4 from left to right.芸薹根肿菌单孢分离方法的建立——琼脂糖凝层法脂糖浓度的筛选对不同琼脂糖溶液的筛选，确定杂质较少、透明度较清晰、硬度适中、易于脂糖凝层。称取 0.3 g、0.36 g、0.39 g、0.45 g、0.54 g 和 0.6 g 的琼脂糖分别分别量取 30 mL 蒸馏水加入三角瓶，放于高压灭菌锅高压灭菌 121℃ 30 mi1.2%、1.3%、1.5%、1.8%和 2%的琼脂糖溶液。待溶液冷却至 55℃左右时，不同琼脂糖溶液中均匀蘸取一层。述试验内容 2.2.2.1 制备根肿菌孢悬液，利用血球计数板将云南省昆明市云南悬液调整到理论值为 5×103个孢子·mL-1。待蘸取的琼脂糖溶液薄层凝固后，悬液各 5 μL，均匀涂布于各琼脂糖凝层。在显微镜下观察，用手术刀切取约眠孢子的琼脂糖凝层。此过程需快速完成，不可将琼脂糖薄层风干。?

河北北方学院硕士学位论文 第二章 材料与方法复分别接种 4 个鉴别寄主（JQ、BS、LT、WB）各 10 株甘蓝幼苗，避免不同单孢系菌株之间相互感染，同时以感病品种‘菊心’作为对照，55 d 后调查并记录各个寄主发病情况，统计根肿病的发病率及病情指数并对结果进行分析，调查方法及病情分级同 2.2.1.1。?病情指数≥10 为感病（+），病情指数＜10 为抗病（-）。

0.90 60 透明度适中、质地适中、1.08 60 透明度一般、质地较硬、琼1.20 60 透明度差、质地太硬、琼度琼脂糖凝块对根肿菌休眠孢子活力影响差异不显著（表 3-3，2-PI 双荧光复染法对琼脂糖块处理后的根肿菌孢悬液进行染色观察发菌孢子活性是无影响，可供后期试验。表 3-3 不同琼脂糖浓度对根肿菌休眠孢子活力影响Table 3-3 Effect of different agarose concentration to P. brassicae resting spores vit浓度（m/v）Concentration平均活孢子率（%）Live spores rates1% 97.431.2% 97.781.3% 98.381.5% 98.241.8% 98.382.0% 98.29对照孢子 98.37
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本文编号：2852706