柑桔黄化脉明病毒传播途径初步研究
发布时间：2020-10-26 21:46
柑桔黄化脉明病是由柑桔黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)引起的一种新发柑桔病害。1988年,CYVCV首次在巴基斯坦的柠檬(Citrus limon)和酸橙(C.aurantium)上被发现。自2009年在中国首次被发现以来,该病传播迅速,目前已在中国各柑桔主产省区均有分布。柑桔黄化脉明病能够危害大多数的柑桔类型,其中以柠檬、酸橙最为敏感。柠檬敏感类型发病后叶脉黄化、透明、叶片脱落、产量降低,甚至绝收,对我国柠檬产业造成严重的经济损失。目前已知CYVCV除可以通过感病苗木和接穗在柑桔间进行传播外,还可以通过豆蚜(Aphis craccivora)和绣线菊蚜(A.spiraecola)在菜豆之间,以及柠檬到菜豆之间进行传播。但目前尚不清楚CYVCV在柑桔间的传播媒介,也不清楚是否还存在其它的传播途径,因此给柑桔黄化脉明病的防控造成了困难。为此,本研究对柑桔黄化脉明病的传播途径开展了系统研究。本研究在明确柑桔园中常见节肢动物种类携带CYVCV的基础上,检测了绣线菊蚜、褐色桔蚜(Toxoptera citricidus)、柑桔红蜘蛛(Panonychus citri)和柑桔粉虱(Dialeurodes citri)在柑桔间的传毒能力。同时测定了CYVCV通过污染刀具进行传播的可能性,也对重庆和四川周边CYVCV高发柑桔果园中的龙葵进行田间检测,以期明确CYVCV在柑桔间的传播途径,从而为CYVCV的防治和流行学研究奠定基础。主要结果如下:1.运用实时荧光定量PCR法在田间常见的绣线菊蚜、褐色桔蚜、柑桔红蜘蛛和柑桔粉虱中检测出了CYVCV。此外,建立了CYVCV的微滴数字PCR检测体系。该方法特异性良好,灵敏度为实时荧光定量PCR的100倍,今后可用于CYVCV的早期检测及单头节肢动物的带毒量检测。2.绣线菊蚜传毒实验。温室条件下,在毒源甜橙植株上饲养绣线菊蚜无翅成蚜48 h,将其放置在受毒无毒植株上取食24 h,每株分别放置50头(3个处理,每个处理15株)。在受毒植株上取食48 h,每株分别放置50头(3个处理,每个处理30株)。取食时间24 h,取食后3个月和6个月,DTBIA和RT-PCR检测结果显示,4.4%的受毒植株感染了CYVCV。取食时间48 h,取食后3个月后,DTBIA和RT-PCR检测结果显示,其平均检出率分别为15.5%和17.8%。取食后6个月后,DTBIA和RT-PCR检测结果一致,其平均检出率均为23.3%。本研究首次证实CYVCV可以通过绣线菊蚜在柑桔间进行传播。3.褐色桔蚜传毒实验。温室条件下,在毒源甜橙植株上饲养褐色桔蚜无翅成蚜48 h,然后将饲毒后的桔蚜放置在受毒植株甜橙实生苗上取食24 h,每株分别放置50头(29株),100头(29株),150头(29株)。在取食后3个月、6个月和12个月,进行DTBIA和RT-PCR检测,均未能在受毒植株中检测到CYVCV。4.柑桔红蜘蛛传毒实验。温室条件下,在毒源酸橙植株上饲养柑桔红蜘蛛成螨48 h,将饲毒后的柑桔红蜘蛛成螨放置在受毒植株酸橙实生苗上取食24h,每株分别放置100头(13株),200头(13株),300头(13株)。取食后3个月、6个月和12个月,进行DTBIA和RT-PCR检测,均未能在受毒植株中检测到CYVCV。5.柑桔粉虱传毒实验。将柑桔粉虱成虫在毒源凤梨甜橙植株上饲喂48 h,然后将其置于无毒代代酸橙实生苗上取食48 h。3个处理,每个处理23株。取食后3个月和6个月,对受毒植株进行DTBIA和RT-PCR检测。取食后3个月和6个月,DTBIA与RT-PCR检测一致,其平均检出率分别为31.9%和39.1%。本研究首次证实CYVCV可以通过柑桔粉虱成虫在柑桔间进行传播。6.污染刀具传毒实验。将嫁接刀在毒源植株的茎上重复切割,然后立刻将污染后的嫁接刀在受毒植株的茎部切开,每株接种植株切割50刀。接种后3个月,DTBIA和RT-PCR检测结果显示,接种植株的平均检出率分别为11.7%和16.5%。接种代代酸橙实生苗中的感病植株在接种后2个月,表现出明显的柑桔黄化脉明病症状。接种后6个月,DTBIA和RT-PCR检测结果显示,代代酸橙的平均检出率分别为20.4%和23.3%。接种后3个月和6个月,DTBIA和RT-PCR检测结果显示,接种植株的检出率均为20.0%。接种后3个月,DTBIA和RT-PCR检测结果显示,阳性对照组内的10株柑桔实生苗(5株代代酸橙和5株粗柠檬)均检测到CYVCV。接种后6个月,在阴性对照组(5株代代酸橙和5株粗柠檬)中均没有检测到CYVCV。因此,证实CYVCV可以通过污染刀具方式在柑桔间进行传播。7.尚未在柑桔黄化脉明病重病果园的龙葵上检测到CYVCV。
【学位单位】：西南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S436.66
【部分图文】：
（Mandarivirus）的柑桔黄化脉明病毒（Citrus yellow vein clearing virus，CYVCV）[13]。CYVCV 粒子呈弯曲线状，大小约为（13-14）nm ×685nm[14]。CYVCV 基因组是由 7529 个核苷酸组成的正单链 RNA，具有 5′、3′端非编码区（UTR）和 Poly（A）结构[13]。部分 CYVCV 毒株 5′UTR 的第 28 和 29 位核苷酸会出现 2 个碱基（“-CA-”）的插入，尚不清楚该结构具有何种功能[15]。CYVCV 的基因组含有 6 个以 ATG 作为起始密码子，分别以 TAA（ORF1，ORF4，ORF5）和 TGA（ORF2、ORF3、ORF6）为终止密码子的开放读码框（ORFs）。其中 ORF1 编码病毒的复制酶蛋白，ORF2、ORF3、ORF4 部分重叠组成一个三基因区域（triple gene block，TGB），分别合成 25kDa、12kDa 和 6.4kDa 的蛋白质，其功能可能与病毒在细胞间的运动有关。ORF5编码病毒的外壳蛋白。ORF6与ORF5部分重叠，编码一个23kDa的细胞核酸结合蛋白[13]。通过对不同地区和不同寄主品种 CYVCV 毒株的全序列分析发现，该病毒存在较高的保守性，其基因组不因地域、毒株或寄主柑桔品种差异而发生显著变异[15-17]。此外，来自中国、巴基斯坦和土耳其的 CYVCV 毒株分别位于进化树上的不同分支，意味着 CYVCV 可能存在不同的起源地[11]。
第一章 文献综述辣椒（Capsicum annuum）、藜麦（Chenopodium quinoa）等草本植物[14]。近年来在锦葵（Malva sylvestris）、龙葵（Solanum nigrum）、野芥（Sinapis arvensis）和田野毛茛（Rananculus arvensis）上亦检测出了 CYVCV[21]。1.2.1.4 症状及品种敏感性CYVCV 在不同柑桔品种上引起的症状存在显著差异，其中柠檬、酸橙和德维特橘橙上的症状最为显著。病株表现出叶脉黄化、脉明、叶背水浸状、叶片反卷皱缩甚至叶片脱落，影响树势和产量。叶片老熟后黄化症状消褪并转绿，但叶片皱缩症状不会恢复，且对光看脉明明显[22]。此外，葡萄柚（C. paradisi）、琯溪蜜柚（C. grandis）、部分甜橙（C. sinensis）和宽皮柑桔（C. reticulata）品种感病后仅春梢嫩叶表现出轻微脉明，且枝梢老熟后症状消失[23]。近来的研究还显示，CYVCV 在不同寄主上引起的症状差异与植株中的病毒含量无明显的相关性[17]。
图 3.1 4 种节肢动物 RNA: DL5000 分子量标准；1：绣线菊蚜；2：褐色桔蚜；3：柑桔红蜘蛛；4：柑桔粉虱A of four arthropods, DL5000 DNA ladders; 1, Aphis spiraecola ; 2, Toxoptera citricidus; 3, Panonychus citri;节肢动物带毒情况检测YVCV 高发柑桔果园中收集绣线菊蚜、褐色桔蚜、柑桔红蜘蛛节肢动物成虫。利用实时荧光定量 PCR 检测 4 种节肢动物带毒通过 RT-qPCR 法均可以在绣线菊蚜、褐色桔蚜、柑桔红蜘蛛和检测到 CYVCV。菊蚜：50头绣线菊蚜混合时，在30个混样中，13个混样未检测到检测出 CYVCV，检出率为 56.7 %。100 头绣线菊蚜混合时，个混样未检出 CYVCV，11 个混样检测出 CYVCV，检出率为 5桔蚜：50 头褐色桔蚜混合时，在 17 个混样中，8 个混样未检出
【参考文献】
本文编号：2857551
【学位单位】：西南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S436.66
【部分图文】：
（Mandarivirus）的柑桔黄化脉明病毒（Citrus yellow vein clearing virus，CYVCV）[13]。CYVCV 粒子呈弯曲线状，大小约为（13-14）nm ×685nm[14]。CYVCV 基因组是由 7529 个核苷酸组成的正单链 RNA，具有 5′、3′端非编码区（UTR）和 Poly（A）结构[13]。部分 CYVCV 毒株 5′UTR 的第 28 和 29 位核苷酸会出现 2 个碱基（“-CA-”）的插入，尚不清楚该结构具有何种功能[15]。CYVCV 的基因组含有 6 个以 ATG 作为起始密码子，分别以 TAA（ORF1，ORF4，ORF5）和 TGA（ORF2、ORF3、ORF6）为终止密码子的开放读码框（ORFs）。其中 ORF1 编码病毒的复制酶蛋白，ORF2、ORF3、ORF4 部分重叠组成一个三基因区域（triple gene block，TGB），分别合成 25kDa、12kDa 和 6.4kDa 的蛋白质，其功能可能与病毒在细胞间的运动有关。ORF5编码病毒的外壳蛋白。ORF6与ORF5部分重叠，编码一个23kDa的细胞核酸结合蛋白[13]。通过对不同地区和不同寄主品种 CYVCV 毒株的全序列分析发现，该病毒存在较高的保守性，其基因组不因地域、毒株或寄主柑桔品种差异而发生显著变异[15-17]。此外，来自中国、巴基斯坦和土耳其的 CYVCV 毒株分别位于进化树上的不同分支，意味着 CYVCV 可能存在不同的起源地[11]。
第一章 文献综述辣椒（Capsicum annuum）、藜麦（Chenopodium quinoa）等草本植物[14]。近年来在锦葵（Malva sylvestris）、龙葵（Solanum nigrum）、野芥（Sinapis arvensis）和田野毛茛（Rananculus arvensis）上亦检测出了 CYVCV[21]。1.2.1.4 症状及品种敏感性CYVCV 在不同柑桔品种上引起的症状存在显著差异，其中柠檬、酸橙和德维特橘橙上的症状最为显著。病株表现出叶脉黄化、脉明、叶背水浸状、叶片反卷皱缩甚至叶片脱落，影响树势和产量。叶片老熟后黄化症状消褪并转绿，但叶片皱缩症状不会恢复，且对光看脉明明显[22]。此外，葡萄柚（C. paradisi）、琯溪蜜柚（C. grandis）、部分甜橙（C. sinensis）和宽皮柑桔（C. reticulata）品种感病后仅春梢嫩叶表现出轻微脉明，且枝梢老熟后症状消失[23]。近来的研究还显示，CYVCV 在不同寄主上引起的症状差异与植株中的病毒含量无明显的相关性[17]。
图 3.1 4 种节肢动物 RNA: DL5000 分子量标准；1：绣线菊蚜；2：褐色桔蚜；3：柑桔红蜘蛛；4：柑桔粉虱A of four arthropods, DL5000 DNA ladders; 1, Aphis spiraecola ; 2, Toxoptera citricidus; 3, Panonychus citri;节肢动物带毒情况检测YVCV 高发柑桔果园中收集绣线菊蚜、褐色桔蚜、柑桔红蜘蛛节肢动物成虫。利用实时荧光定量 PCR 检测 4 种节肢动物带毒通过 RT-qPCR 法均可以在绣线菊蚜、褐色桔蚜、柑桔红蜘蛛和检测到 CYVCV。菊蚜：50头绣线菊蚜混合时，在30个混样中，13个混样未检测到检测出 CYVCV，检出率为 56.7 %。100 头绣线菊蚜混合时，个混样未检出 CYVCV，11 个混样检测出 CYVCV，检出率为 5桔蚜：50 头褐色桔蚜混合时，在 17 个混样中，8 个混样未检出
【参考文献】
相关期刊论文 前10条
1 宾羽;宋震;李中安;周常勇;;柑橘黄化脉明病毒DTBIA检测方法的建立[J];园艺学报;2015年09期
2 陈洪明;王雪峰;周彦;周常勇;郭俊;李中安;;尤力克柠檬上一种新病害的生物学特性及RT-PCR检测[J];植物保护学报;2015年04期
3 刘科宏;陈洪明;周彦;李中安;;柑橘黄化脉明病毒RT-LAMP检测方法的建立[J];园艺学报;2015年05期
4 周彦;王雪峰;陈洪明;李中安;刘科宏;周常勇;;柑橘衰退病毒含量对其蚜传效率的影响[J];植物保护学报;2015年01期
5 李俊香;古勤生;;黄瓜绿斑驳花叶病毒传播方式的研究进展[J];中国蔬菜;2015年01期
6 胡伟;陈荣华;张晨;安志远;王斌;平原;;微滴式数字PCR技术用于生物样品种属鉴定和绝对定量[J];法医学杂志;2014年05期
7 姜羽;胡佳莹;杨立桃;;利用微滴数字PCR分析转基因生物外源基因拷贝数[J];农业生物技术学报;2014年10期
8 邓乐晔;张珂;付昊昊;祝绍文;李志斌;胡美英;赵海明;翁群芳;;辐照结合不同温度处理对柑橘红蜘蛛成螨的影响[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2014年07期
9 陈洪明;刘科宏;周彦;王雪峰;周常勇;李中安;;柑桔黄脉病毒脱毒方法研究[J];中国南方果树;2014年03期
10 周常勇;王雪峰;周彦;刘金香;;我国柑桔病毒病发生和防控进展[J];中国果业信息;2013年10期
本文编号：2857551
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