苹果轮纹病激发的SA特异性诱导表达基因MdWRKY40的抗病功能鉴定
发布时间：2021-01-15 04:15
苹果轮纹病是苹果生产中最重要的病害之一,可危害苹果的枝干和果实,给苹果产业造成巨大损失,据统计,中国苹果产区每年因苹果轮纹病造成的损失高达50亿元。WRKY转录因子参与植物的各种生理过程,其中一个主要功能与植物的抗病有关,在植物的抗病反应调控网络中起着关键作用。而到目前为止,虽然WRKY转录因子在拟南芥、烟草等模式植物中已有较深入研究,但对于调控苹果对轮纹病抗性的苹果基因组WRKY转录因子的筛选与鉴定,国内外仍研究报道较少,因此,本研究以转基因苹果愈伤组织和拟南芥为材料,并利用原生质体转化、接菌等技术,鉴定MdWRKY40基因的生物学功能,来阐明MdWRKY40基因在苹果抵御轮纹病菌侵染过程中的作用,为进一步揭示苹果的抗病机制以及培育抗病新品种提供理论依据。主要研究结果如下:1.以‘红富士’苹果果实为试材,克隆得到MdWRKY40基因的全长CDS序列,系统进化树分析表明,苹果MdWRKY40与白梨PbWRKY40序列相似性最高,亲缘关系最近,蛋白序列比对分析发现,MdWRKY40蛋白与拟南芥AtWRKY4、AtWRKY40蛋白都包含5个β折叠,都含有一个C2H
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MdWRKY40表达载体构建（A）MdWRKY40编码区全长的PCR扩增；（B）pCB302-35S-MdWRKY40-2HA表达载体酶切验证
图 7 愈伤组织（A）轮纹病菌侵染苹果愈伤组织表型；（Fig. 7 Callus Inocula(A) The phenotype of apple callus after infected by B. dothiB. d3.6.3 超表达 MdWRKY40 对接菌后苹果愈伤病程相关蛋白 PRs 是植物先天免疫系统面发挥重要作用，其中 PR1、PR2 和 PR5 主参与 JA 抗病信号通路。为了进一步研究 M用，通过 qRT-PCR 方法检测接种苹果轮纹病‘王林’愈伤组织中病程相关蛋白基因的表相关蛋白基因 MdPR2、MdPR5、MdPR8 的8）。图 7 的结果显示，接种苹果轮纹病菌
Fig. 10 Gene silencing callu(A) The phenotype of apple callus after infected by B. dothidedothidea; (C) MdPR2 gene expression induced by B. dothidsamples 0-0.5 cm, 0.5-1 cm, and 1-1.5 cm from lesions,thdothidea; (E) MdPR5 gene expression induced by B. dot3.8 异源表达 MdWRKY40 对拟南芥轮3.8.1 转基因拟南芥的鉴定将构建的 MdWRKY40 过表达载体转化利用 35S 启动子引物和下游克隆引物进行然后利用半定量和定量 PCR 进一步验证阳基因在转基因株系 7#、12#中的表达量显著果显示，与野生型拟南芥相比，转基因拟南585 倍和 545 倍，与半定量结果一致，证明达（图 11C）。A7#12#ColCK 质粒/plasmi1500 bp
【参考文献】：
期刊论文
[1]水杨酸诱导苹果采后灰霉病抗性研究[J]. 石亚莉,周会玲,唐永萍,贺军花,马利菁. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2018(02)
[2]本氏烟NbWRKY40亚家族转录因子抗病相关功能研究[J]. 马丽娜,张雄,窦道龙,柴春月. 植物病理学报. 2016(06)
[3]烟草NtWRKY40在植物应答病毒侵染过程中的作用[J]. 刘晶晶,程春玲,席玉珍,魏书. 生物技术通报. 2016(10)
[4]采前水杨酸处理对杏果实抗病性及苯丙烷代谢的诱导[J]. 赵亚婷,朱璇,马玄,郭杨美娟. 食品科学. 2015(02)
[5]水杨酸结合超声波处理对芒果采后抗病性的影响[J]. 杨冬平,高兆银,李敏,张正科,陈亮,杨波,赵超,胡美姣. 热带作物学报. 2014(05)
[6]富士苹果MdWRKY40b基因克隆及其对白粉病的抗性分析[J]. 罗昌国,袁启凤,裴晓红,吴亚维,郑伟,章镇. 西北植物学报. 2013(12)
[7]中国苹果枝干轮纹病发生和防治情况[J]. 国立耘,李金云,李保华,张新忠,周增强,李广旭,王英姿,李晓军,黄丽丽,孙广宇,文耀东. 植物保护. 2009(04)
[8]苹果轮纹病研究进展[J]. 康玲,郝红梅,杨振英,李晓旭,康国栋. 中国农学通报. 2009(09)
[9]苹果轮纹病枝条侵染时期研究[J]. 周增强,侯珲,冯桂馨,杨朝选,赵飞鹏. 果树学报. 2006(06)
[10]采后苹果果实轮纹病的研究进展[J]. 薛莲,檀根甲. 安徽农业科学. 2004(06)
本文编号：2978208
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MdWRKY40表达载体构建（A）MdWRKY40编码区全长的PCR扩增；（B）pCB302-35S-MdWRKY40-2HA表达载体酶切验证
图 7 愈伤组织（A）轮纹病菌侵染苹果愈伤组织表型；（Fig. 7 Callus Inocula(A) The phenotype of apple callus after infected by B. dothiB. d3.6.3 超表达 MdWRKY40 对接菌后苹果愈伤病程相关蛋白 PRs 是植物先天免疫系统面发挥重要作用，其中 PR1、PR2 和 PR5 主参与 JA 抗病信号通路。为了进一步研究 M用，通过 qRT-PCR 方法检测接种苹果轮纹病‘王林’愈伤组织中病程相关蛋白基因的表相关蛋白基因 MdPR2、MdPR5、MdPR8 的8）。图 7 的结果显示，接种苹果轮纹病菌
Fig. 10 Gene silencing callu(A) The phenotype of apple callus after infected by B. dothidedothidea; (C) MdPR2 gene expression induced by B. dothidsamples 0-0.5 cm, 0.5-1 cm, and 1-1.5 cm from lesions,thdothidea; (E) MdPR5 gene expression induced by B. dot3.8 异源表达 MdWRKY40 对拟南芥轮3.8.1 转基因拟南芥的鉴定将构建的 MdWRKY40 过表达载体转化利用 35S 启动子引物和下游克隆引物进行然后利用半定量和定量 PCR 进一步验证阳基因在转基因株系 7#、12#中的表达量显著果显示，与野生型拟南芥相比，转基因拟南585 倍和 545 倍，与半定量结果一致，证明达（图 11C）。A7#12#ColCK 质粒/plasmi1500 bp
【参考文献】：
期刊论文
[1]水杨酸诱导苹果采后灰霉病抗性研究[J]. 石亚莉,周会玲,唐永萍,贺军花,马利菁. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2018(02)
[2]本氏烟NbWRKY40亚家族转录因子抗病相关功能研究[J]. 马丽娜,张雄,窦道龙,柴春月. 植物病理学报. 2016(06)
[3]烟草NtWRKY40在植物应答病毒侵染过程中的作用[J]. 刘晶晶,程春玲,席玉珍,魏书. 生物技术通报. 2016(10)
[4]采前水杨酸处理对杏果实抗病性及苯丙烷代谢的诱导[J]. 赵亚婷,朱璇,马玄,郭杨美娟. 食品科学. 2015(02)
[5]水杨酸结合超声波处理对芒果采后抗病性的影响[J]. 杨冬平,高兆银,李敏,张正科,陈亮,杨波,赵超,胡美姣. 热带作物学报. 2014(05)
[6]富士苹果MdWRKY40b基因克隆及其对白粉病的抗性分析[J]. 罗昌国,袁启凤,裴晓红,吴亚维,郑伟,章镇. 西北植物学报. 2013(12)
[7]中国苹果枝干轮纹病发生和防治情况[J]. 国立耘,李金云,李保华,张新忠,周增强,李广旭,王英姿,李晓军,黄丽丽,孙广宇,文耀东. 植物保护. 2009(04)
[8]苹果轮纹病研究进展[J]. 康玲,郝红梅,杨振英,李晓旭,康国栋. 中国农学通报. 2009(09)
[9]苹果轮纹病枝条侵染时期研究[J]. 周增强,侯珲,冯桂馨,杨朝选,赵飞鹏. 果树学报. 2006(06)
[10]采后苹果果实轮纹病的研究进展[J]. 薛莲,檀根甲. 安徽农业科学. 2004(06)
本文编号：2978208
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