广西瓜类疫病菌对烯酰吗啉的抗药性研究
发布时间：2021-01-22 00:06
本研究为明确广西区瓜类疫病的病原种类,从长期使用烯酰吗啉药剂防治的瓜类产区广泛采集的瓜类疫病菌进行分离及纯化工作,并通过病原的致病性测定、形态特征及核糖体-rDNA的序列分析进行鉴定,比较其对烯酰吗啉的敏感性。并以从广西南宁、武鸣、崇左、桂林、柳州及玉林6个不同地区收集,分离自南瓜、节瓜、甜瓜、冬瓜和黄瓜的疫病菌株共计129株为供试菌,进行病原菌对烯酰吗啉的抗药性检测,建立瓜类疫病菌对烯酰吗啉的相对敏感基线;通过药剂处理和紫外线照射敏感菌株诱导抗药突变体,开展抗药突变体在不同温度、不同pH、致病性及生长量等方面的研究。主要研究内容如下:1、南瓜疫病是生产中危害最严重的植物病害之一,主要为害南瓜的果实和茎叶,给南瓜生产上造成重大的经济损失。为摸清引起广西南瓜疫病病原的种类,从病原的形态、对寄主植物的致病性及核糖体ITS序列进行分析和鉴定,导致广西南瓜疫病的病原为辣椒疫霉（Phytophthora capsici Leonian）。2、采用菌丝生长速率法,对129株瓜类疫病供试菌株进行烯酰吗啉的敏感性测定,结果显示,敏感菌株和中抗菌株分别占供试菌株的7.8%和92.2%,中抗菌株为优势菌株...
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１南瓜茎（Ａ）和果（Ｂ）的疫病症状??Ｆｉｇ．?２－１?Ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ｏｆ?ｂｌｉｇｈｔ?ｏｎ?ｐｕｍｐｋｉｎ?ｖｉｎｅｓ（Ａ）?ａｎｄ?ｆｒｕｉｔ（Ｂ）??
?广西ＪＳｖ类疫病菌对缔酿吗－林的抗苟性研究??接着叶片软腐，下垂，灰褐色千枯，最终叶片脆裂。果实以爬地栽培南瓜果实发病居??多（图２－１Ｂ），感病部位呈暗绿色水渍状，后渐腐湿，病状局部表面产生白色霉状??物［２］。??图２－１南瓜茎（Ａ）和果（Ｂ）的疫病症状??Ｆｉｇ．?２－１?Ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ｏｆ?ｂｌｉｇｈｔ?ｏｎ?ｐｕｍｐｋｉｎ?ｖｉｎｅｓ（Ａ）?ａｎｄ?ｆｒｕｉｔ（Ｂ）??２．２．２病原菌的致病性测定??为明确分离菌的致病性，在健康状况良好的南瓜茎蔓上，通过利器挫伤或刺茎蔓，??回接经纯化培养的发病组织分离的病原菌，２５？３１°Ｃ温度下保持湿度去培养。在接种??３ｄ后就能发现病症，水渍状病斑出现，之后病斑逐渐扩散至环茎一周缢缩，病部以??上部分青枯萎蔫，其发病的症状特征与田间自然发病症状相似，从发病组织上分离的??病原菌与田间发病组织分离的病原菌形态一致，鉴定为南瓜疫病的病原菌。??２．２．３病原菌的形态学特征??在ＯＡ固体培养基上，病原菌菌落呈绒毛状，气生菌丝中等至旺盛，较均匀一致，??无隔膜，直径４．１？７．６，，平均５．５?ｐｍ，白色。在固体培养基上基本没有见到孢子囊??的形成
３?３．?５?４?４．?５?５?５．５?６?６．５?７?７．５?８?８．５?９?９．?５?１０?１０．５?１１??ｐＨ??图２－４?ｐＨ值对菌株ＮＮＮＧ－２生长的影响??Ｆｉｇ．?２－４?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｐＨｓ?ｏｎ?ｇｒｏｗｔｈ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｉｓｏｌａｔｅ?ＮＮＮＧ－２??２．２．８南瓜疫病的分子生物学鉴定??从病原菌株ＮＮＮＧ－３提取ＤＮＡ模板，用ｒＤＮＡ的ＩＴＳ区段通用引物ＩＴＳ?１与ＩＴＳ４??进行扩增，并进行序列测定，获得长度为７６０?ｂｐ的特异性片段（图２－５）。将该片段序??列在ＧｅｎＢａｎｋ中进行ＢＬＡＳＴ比对，结果显示，该序列与ＧｅｎＢａｎｋ中已报道的多个??辣椒疫霉尸ｃｆｌｐｓ沾菌株ＩＴＳ序列的同源性最高，相似度为９７％?（图２－６）。该病原菌??株ＮＮＮＧ－３的ＩＴＳ序列在ＧｅｎＢａｎｋ登录号为ＫＪ５７２９６９。结合该疫病病原菌的形态特??征［３９１、生物学特性及ｒＤＮＡ的ＩＴＳ序列分析，我们鉴定广西南瓜疫病的病原为辣椒疫??霉?ｉＰ．?ｃａｐｓｉｃｉ）。??１２??
本文编号：2992145
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１南瓜茎（Ａ）和果（Ｂ）的疫病症状??Ｆｉｇ．?２－１?Ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ｏｆ?ｂｌｉｇｈｔ?ｏｎ?ｐｕｍｐｋｉｎ?ｖｉｎｅｓ（Ａ）?ａｎｄ?ｆｒｕｉｔ（Ｂ）??
?广西ＪＳｖ类疫病菌对缔酿吗－林的抗苟性研究??接着叶片软腐，下垂，灰褐色千枯，最终叶片脆裂。果实以爬地栽培南瓜果实发病居??多（图２－１Ｂ），感病部位呈暗绿色水渍状，后渐腐湿，病状局部表面产生白色霉状??物［２］。??图２－１南瓜茎（Ａ）和果（Ｂ）的疫病症状??Ｆｉｇ．?２－１?Ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ｏｆ?ｂｌｉｇｈｔ?ｏｎ?ｐｕｍｐｋｉｎ?ｖｉｎｅｓ（Ａ）?ａｎｄ?ｆｒｕｉｔ（Ｂ）??２．２．２病原菌的致病性测定??为明确分离菌的致病性，在健康状况良好的南瓜茎蔓上，通过利器挫伤或刺茎蔓，??回接经纯化培养的发病组织分离的病原菌，２５？３１°Ｃ温度下保持湿度去培养。在接种??３ｄ后就能发现病症，水渍状病斑出现，之后病斑逐渐扩散至环茎一周缢缩，病部以??上部分青枯萎蔫，其发病的症状特征与田间自然发病症状相似，从发病组织上分离的??病原菌与田间发病组织分离的病原菌形态一致，鉴定为南瓜疫病的病原菌。??２．２．３病原菌的形态学特征??在ＯＡ固体培养基上，病原菌菌落呈绒毛状，气生菌丝中等至旺盛，较均匀一致，??无隔膜，直径４．１？７．６，，平均５．５?ｐｍ，白色。在固体培养基上基本没有见到孢子囊??的形成
３?３．?５?４?４．?５?５?５．５?６?６．５?７?７．５?８?８．５?９?９．?５?１０?１０．５?１１??ｐＨ??图２－４?ｐＨ值对菌株ＮＮＮＧ－２生长的影响??Ｆｉｇ．?２－４?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｐＨｓ?ｏｎ?ｇｒｏｗｔｈ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｉｓｏｌａｔｅ?ＮＮＮＧ－２??２．２．８南瓜疫病的分子生物学鉴定??从病原菌株ＮＮＮＧ－３提取ＤＮＡ模板，用ｒＤＮＡ的ＩＴＳ区段通用引物ＩＴＳ?１与ＩＴＳ４??进行扩增，并进行序列测定，获得长度为７６０?ｂｐ的特异性片段（图２－５）。将该片段序??列在ＧｅｎＢａｎｋ中进行ＢＬＡＳＴ比对，结果显示，该序列与ＧｅｎＢａｎｋ中已报道的多个??辣椒疫霉尸ｃｆｌｐｓ沾菌株ＩＴＳ序列的同源性最高，相似度为９７％?（图２－６）。该病原菌??株ＮＮＮＧ－３的ＩＴＳ序列在ＧｅｎＢａｎｋ登录号为ＫＪ５７２９６９。结合该疫病病原菌的形态特??征［３９１、生物学特性及ｒＤＮＡ的ＩＴＳ序列分析，我们鉴定广西南瓜疫病的病原为辣椒疫??霉?ｉＰ．?ｃａｐｓｉｃｉ）。??１２??
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