番木瓜环斑病毒西瓜株系的致病机制与弱毒突变体应用
发布时间：2021-02-25 11:20
番木瓜环斑病毒（Papaya ringspot virus,PRSV）属于马铃薯Y病毒属（Potyvirus）,根据寄主范围可以分为P（PRSV-P）和W（PRSV-W）两个株系。PRSV-W主要侵染西葫芦、甜瓜等葫芦科作物,可引起叶片卷曲、畸形、花叶和泡斑,植株矮化等症状,造成果实畸形或在表面形成水渍状环斑,降低了产量和品质,严重时甚至绝产。目前PRSV在中国、波兰、印度、巴西等地均有发生,是危害葫芦科作物生产的重要病毒。本研究获得并分析了PRSV山东分离物（PRSV-SD）的全基因组序列,构建了PRSV-SD全长侵染性cDNA克隆,筛选出PRSV弱毒突变体并验证了其交叉保护效果。从山东济南采集到叶片表现畸形、花叶,果实表面环斑的西葫芦样品,经检测其中含PRSV。通过RT-PCR分段扩增其全基因组片段并进行序列测定,结果表明,除了3′-端poly（A）尾以外,PRSV-SD基因组全长10337核苷酸（nt）,5′-和3′-NCR分别为90 nt和206 nt,开放阅读框编码3346个氨基酸。PRSV-SD与另外18个PRSV分离物的全基因组核苷酸一致率为82.0%8
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
植物RNA病毒侵染性克隆的两种方法比较(NagyováandSubr,2007)
京市六一仪器厂 DYY-8C 型）、凝胶成像仪（SageCreation）、手持式长波紫外灯（UVPmodelB100A）、离心机（Eppendorf5417R）、水浴锅（宁波江南仪器厂 SDC-6）、恒温摇床（Honour HNY-2102C）、超微量分光光度计（Analytikjena Scandrop）、超净工作台（苏净安泰 SW-CJ-1BU）、酶联免疫测定仪（BioRadModel550）、高压灭菌锅（Yamato SM830）、全自动化学发光仪（ChampChemi）等。2.2 实验方法2.2.1 序列测定与分析2.2.1.1 扩增策略与引物设计比对 GneBank 中多个 PRSV 分离物的核苷酸序列，选取保守区段设计引物，分4段扩增5′-端以外的基因组序列。然后根据已得到的近5′-端序列设计5′-RACE引物。扩增策略按照图 2-1 进行，相邻片段之间有 200bp 左右的重叠。
图 2-2 PRSV 山东分离物全长 cDNA 克隆构建策略Fig. 2-2 Strategy for constructing the full-length cDNA clone of PRS表 2-2 构建 PRSV 山东分离物全长 cDNA 克隆所用引物ble 2-2 Primers used in constructing the full-length cDNA clone of PR Nucleotide sequence （5′ to 3′）AAAAAAAATAAAACATCTCAACACAACAC CCGATTCTTAGTGCAATTCCCT TCATACAGAGAAGGGTATCCAAGAA CTCTCATTCCAAGAGGCTCGAATAG F TGCACTAAGAATCGGCCCCGGGAATTCTAAGAGG TGTTTTATTTTTTTTCTCTCCAAATGAAATGAACTTCC
【参考文献】：
期刊论文
[1]番木瓜环斑病毒西瓜株系衣壳蛋白的原核表达及抗血清制备[J]. 黄显德,王玉,田延平,古勤生,李向东. 山东农业科学. 2017(12)
[2]番木瓜品种资源对环斑病毒病抗性综合评价[J]. 何凡,范鸿雁,华敏,王祥和,何舒,周世强. 中国南方果树. 2008(04)
[3]番木瓜环斑病毒海南分离株全基因组序列分析[J]. 卢雅薇,沈文涛,唐清杰,牛艳梅,周鹏. 病毒学报. 2008(02)
[4]番木瓜环斑病毒研究进展[J]. 黄江华,黄嘉薇,张建军,彭仁. 安徽农业科学. 2008(08)
[5]抗环斑型花叶病毒病番木瓜新品种选育研究初报[J]. 黄建昌,肖艳,梁关生,赵春香,李宏彬. 西南农业大学学报(自然科学版). 2004(06)
[6]葫芦科作物病毒名录[J]. 古勤生,范在丰,李怀方. 中国西瓜甜瓜. 2002(01)
[7]麦二叉蚜传播玉米矮花叶病毒的机制[J]. 李向东,范在丰,李怀方,裘维蕃. 植物保护学报. 2002(01)
[8]交叉保护在植物病毒病害防治中作用的概述[J]. 崔伯法,王洪祥,翁法令. 中国生物防治. 1998(02)
[9]华南番木瓜病毒病及环斑病毒株系的调查鉴定[J]. 蔡建和,范怀忠. 华南农业大学学报. 1994(04)
[10]番木瓜环斑病毒株系间交互保护作用研究[J]. 肖火根,范怀忠. 病毒学报. 1994(02)
本文编号：3050892
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
植物RNA病毒侵染性克隆的两种方法比较(NagyováandSubr,2007)
京市六一仪器厂 DYY-8C 型）、凝胶成像仪（SageCreation）、手持式长波紫外灯（UVPmodelB100A）、离心机（Eppendorf5417R）、水浴锅（宁波江南仪器厂 SDC-6）、恒温摇床（Honour HNY-2102C）、超微量分光光度计（Analytikjena Scandrop）、超净工作台（苏净安泰 SW-CJ-1BU）、酶联免疫测定仪（BioRadModel550）、高压灭菌锅（Yamato SM830）、全自动化学发光仪（ChampChemi）等。2.2 实验方法2.2.1 序列测定与分析2.2.1.1 扩增策略与引物设计比对 GneBank 中多个 PRSV 分离物的核苷酸序列，选取保守区段设计引物，分4段扩增5′-端以外的基因组序列。然后根据已得到的近5′-端序列设计5′-RACE引物。扩增策略按照图 2-1 进行，相邻片段之间有 200bp 左右的重叠。
图 2-2 PRSV 山东分离物全长 cDNA 克隆构建策略Fig. 2-2 Strategy for constructing the full-length cDNA clone of PRS表 2-2 构建 PRSV 山东分离物全长 cDNA 克隆所用引物ble 2-2 Primers used in constructing the full-length cDNA clone of PR Nucleotide sequence （5′ to 3′）AAAAAAAATAAAACATCTCAACACAACAC CCGATTCTTAGTGCAATTCCCT TCATACAGAGAAGGGTATCCAAGAA CTCTCATTCCAAGAGGCTCGAATAG F TGCACTAAGAATCGGCCCCGGGAATTCTAAGAGG TGTTTTATTTTTTTTCTCTCCAAATGAAATGAACTTCC
【参考文献】：
期刊论文
[1]番木瓜环斑病毒西瓜株系衣壳蛋白的原核表达及抗血清制备[J]. 黄显德,王玉,田延平,古勤生,李向东. 山东农业科学. 2017(12)
[2]番木瓜品种资源对环斑病毒病抗性综合评价[J]. 何凡,范鸿雁,华敏,王祥和,何舒,周世强. 中国南方果树. 2008(04)
[3]番木瓜环斑病毒海南分离株全基因组序列分析[J]. 卢雅薇,沈文涛,唐清杰,牛艳梅,周鹏. 病毒学报. 2008(02)
[4]番木瓜环斑病毒研究进展[J]. 黄江华,黄嘉薇,张建军,彭仁. 安徽农业科学. 2008(08)
[5]抗环斑型花叶病毒病番木瓜新品种选育研究初报[J]. 黄建昌,肖艳,梁关生,赵春香,李宏彬. 西南农业大学学报(自然科学版). 2004(06)
[6]葫芦科作物病毒名录[J]. 古勤生,范在丰,李怀方. 中国西瓜甜瓜. 2002(01)
[7]麦二叉蚜传播玉米矮花叶病毒的机制[J]. 李向东,范在丰,李怀方,裘维蕃. 植物保护学报. 2002(01)
[8]交叉保护在植物病毒病害防治中作用的概述[J]. 崔伯法,王洪祥,翁法令. 中国生物防治. 1998(02)
[9]华南番木瓜病毒病及环斑病毒株系的调查鉴定[J]. 蔡建和,范怀忠. 华南农业大学学报. 1994(04)
[10]番木瓜环斑病毒株系间交互保护作用研究[J]. 肖火根,范怀忠. 病毒学报. 1994(02)
本文编号：3050892
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/dzwbhlw/3050892.html
