莱氏野村菌Nrssk1与Nrpbs2基因的克隆和功能研究
发布时间：2021-03-02 17:50
莱氏野村菌（Nomuraea rileyi=Metarhizium rileyi）是一种分布广泛的虫生真菌,因其在自然环境中可以感染多种鳞翅目的害虫,可以作为潜在的生物杀虫剂而逐渐受到关注。但是莱氏野村菌分生孢子的产孢需要一定的光照温度等苛刻条件,且不耐储存,这对于以分生孢子作为杀虫制剂有效成分的真菌来说,是制约其工业化生产的重要因素。本实验室经过长期的研究成功实现了莱氏野村菌微菌核的人工诱导,微菌核具有生产成本低、耐高温、耐储存、可持续侵染等特点,因此可以作为分生孢子的有效替代品用于杀虫制剂的生产。本实验室在2012年采用比较转录组技术研究微菌核形成的分子机理,发现在微菌核发育过程中伴随着活性氧（Reactive oxygen species,ROS）的产生。而已有研究表明真菌在应对外部渗透和氧胁迫压力时,两个跨膜蛋白Sholp和Sln1p发挥重要的感受作用,这两个蛋白分别将信号传递给高渗透压甘油信号途径（High osmolarity glycerol,HOG）。另一方面,前期研究表明,莱氏野村菌Nrsho1和Nrsln1基因在调控微菌核的发育方面发挥着重要功能。鉴于此,本文以莱氏...
【文章来源】：重庆大学重庆市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
烟曲霉(Aspergiddusfumigatus)HOG通路示意图(根据Ma,2013重新绘制)
24的农杆菌转化h-Nrssk1 和 Pzp-Ptrpc-Hph-Nrpbs2 质粒克隆摇菌培养的菌液中进行质粒的提剂盒进行提取，操作步骤略。杆菌转化p-Ptrpc-Hph-Nrssk1 和 Pzp-Ptrpc-Hph-Nr化，操作步骤为：态细胞 AGL-1 从保存的-80°C 冰箱中
3 结果与分析3.1 Nrssk1 和 Nrpbs2 基因克隆与生物信息学分析3.1.1 Nrssk1 和 Nrpbs2 基因克隆根据 EST 序列设计基因特异引物，以莱氏野村菌基因组 DNA 为模板进行PCR扩增，测序后获得Nrssk1和Nrpbs2基因的部分序列，经多次扩增及测序拼接，获得了足够长度的 DNA 序列，通过 ORF Finder 在线软件对 Nrssk1 和 Nrpbs2 基因ORF 进行预测，结果显示 Nrssk1 开放阅读框长 2929bp，编码 929 个氨基酸，在距离起始密码子 139bp 和 2634bp 处有两个内含子，分别长 125bp 和 82bp。Nrpbs2基因开放阅读框长 2038bp，编码 649 个氨基酸，在距离其起始密码子 1554bp 处有一个长 85bp 的内含子。
【参考文献】：
期刊论文
[1]莱氏野村菌微菌核一步液体发酵新工艺[J]. 宋章永,殷幼平,姜伟,周桂林,谭文勇,王中康. 中国生物防治学报. 2014(05)
[2]植物MAPK级联途径及其功能研究进展[J]. 张振才,梁燕,李翠. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2014(04)
[3]拟南芥跨膜组氨酸激酶ATHK1研究进展[J]. 陈一. 安徽农业科学. 2014(07)
[4]生物饲料将成为未来发展趋势[J]. 蔡辉益. 中国畜牧业. 2014(02)
[5]正交设计优化桑黄培养基的研究[J]. 张革红,刘文艳. 新乡学院学报(自然科学版). 2013(04)
[6]不同地域莱氏野村菌的培养性状及对斜纹夜蛾的毒力[J]. 唐维媛,彭小东,王欢,周换景,张义明. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2013(03)
[7]莱氏野村菌CQNr01微菌核的人工诱导培养[J]. 殷幼平,黄姗,宋章永,王中康. 中国农业科学. 2012(23)
[8]烟曲霉sho1、pbs2基因额外拷贝对几种应激能力的影响[J]. 马冬梅,季雅娟,阳芳,刘伟,万喆,李若瑜. 中国真菌学杂志. 2012(04)
[9]纳米二氧化钛光催化降解聚丙烯酰胺[J]. 范晓雅,周静,杨祥,赵勇. 精细石油化工. 2012(03)
[10]莱氏野村菌CQNr01对斜纹夜蛾幼虫的侵染研究[J]. 于海勇,王中康,张雯迪,殷幼平. 中国生物防治学报. 2012(02)
博士论文
[1]极细链格孢菌HOG1、PBS2基因克隆及功能初步分析[D]. 冯飞.中国农业科学院 2007
硕士论文
[1]莱氏野村菌的发酵工艺与田间应用潜力评测[D]. 周立峰.安徽农业大学 2011
[2]菜氏野村菌致病性和生物学特性的研究[D]. 李锋.中国农业科学院 2002
本文编号：3059679
【文章来源】：重庆大学重庆市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
烟曲霉(Aspergiddusfumigatus)HOG通路示意图(根据Ma,2013重新绘制)
24的农杆菌转化h-Nrssk1 和 Pzp-Ptrpc-Hph-Nrpbs2 质粒克隆摇菌培养的菌液中进行质粒的提剂盒进行提取，操作步骤略。杆菌转化p-Ptrpc-Hph-Nrssk1 和 Pzp-Ptrpc-Hph-Nr化，操作步骤为：态细胞 AGL-1 从保存的-80°C 冰箱中
3 结果与分析3.1 Nrssk1 和 Nrpbs2 基因克隆与生物信息学分析3.1.1 Nrssk1 和 Nrpbs2 基因克隆根据 EST 序列设计基因特异引物，以莱氏野村菌基因组 DNA 为模板进行PCR扩增，测序后获得Nrssk1和Nrpbs2基因的部分序列，经多次扩增及测序拼接，获得了足够长度的 DNA 序列，通过 ORF Finder 在线软件对 Nrssk1 和 Nrpbs2 基因ORF 进行预测，结果显示 Nrssk1 开放阅读框长 2929bp，编码 929 个氨基酸，在距离起始密码子 139bp 和 2634bp 处有两个内含子，分别长 125bp 和 82bp。Nrpbs2基因开放阅读框长 2038bp，编码 649 个氨基酸，在距离其起始密码子 1554bp 处有一个长 85bp 的内含子。
【参考文献】：
期刊论文
[1]莱氏野村菌微菌核一步液体发酵新工艺[J]. 宋章永,殷幼平,姜伟,周桂林,谭文勇,王中康. 中国生物防治学报. 2014(05)
[2]植物MAPK级联途径及其功能研究进展[J]. 张振才,梁燕,李翠. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2014(04)
[3]拟南芥跨膜组氨酸激酶ATHK1研究进展[J]. 陈一. 安徽农业科学. 2014(07)
[4]生物饲料将成为未来发展趋势[J]. 蔡辉益. 中国畜牧业. 2014(02)
[5]正交设计优化桑黄培养基的研究[J]. 张革红,刘文艳. 新乡学院学报(自然科学版). 2013(04)
[6]不同地域莱氏野村菌的培养性状及对斜纹夜蛾的毒力[J]. 唐维媛,彭小东,王欢,周换景,张义明. 湖南农业大学学报(自然科学版). 2013(03)
[7]莱氏野村菌CQNr01微菌核的人工诱导培养[J]. 殷幼平,黄姗,宋章永,王中康. 中国农业科学. 2012(23)
[8]烟曲霉sho1、pbs2基因额外拷贝对几种应激能力的影响[J]. 马冬梅,季雅娟,阳芳,刘伟,万喆,李若瑜. 中国真菌学杂志. 2012(04)
[9]纳米二氧化钛光催化降解聚丙烯酰胺[J]. 范晓雅,周静,杨祥,赵勇. 精细石油化工. 2012(03)
[10]莱氏野村菌CQNr01对斜纹夜蛾幼虫的侵染研究[J]. 于海勇,王中康,张雯迪,殷幼平. 中国生物防治学报. 2012(02)
博士论文
[1]极细链格孢菌HOG1、PBS2基因克隆及功能初步分析[D]. 冯飞.中国农业科学院 2007
硕士论文
[1]莱氏野村菌的发酵工艺与田间应用潜力评测[D]. 周立峰.安徽农业大学 2011
[2]菜氏野村菌致病性和生物学特性的研究[D]. 李锋.中国农业科学院 2002
本文编号：3059679
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