雌性秦岭大熊猫尿液中类固醇激素ELISA试剂盒的研发及应用
发布时间：2021-03-06 00:16
大熊猫因其物种特殊性,圈养条件下难以准确判断发情排卵时间,难配种,难受孕。检测大熊猫尿液雌二醇（Estradiol,E2）与孕酮（Progesterone,P4）浓度变化规律,有助于准确判断大熊猫的发情、受精、怀孕等生殖活动。而现今市场上缺乏成熟的商品化可用于检测秦岭大熊猫尿液中E2和P4的试剂盒。酶联免疫法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA）操作简单、快捷,灵敏性性高,是目前较为成熟可靠的激素检测方法之一。本研究旨在开发出可用于秦岭大熊猫尿液E2和P4检测的ELISA试剂盒,建立秦岭大熊猫发情、妊娠检测技术体系,为检测大熊猫的生殖活动提供理论依据。主要研究内容和结果如下:（1）制备了可用于试验动物免疫及酶标板包被的完全抗原E2-BSA、E2-OVA、P4-BSA、P4-OVA,其中E2-BSA的偶联比...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩写词表
文献综述
第一章 大熊猫生殖激素检测研究进展
1.1 秦岭大熊猫的现状
1.2 秦岭大熊猫的生殖激素变化
1.2.1 大熊猫自身的繁殖能力
1.2.2 雌性大熊猫发情期的激素变化
1.2.3 大熊猫妊娠期的激素变化
1.3 生殖激素检测的研究进展
1.3.1 样品的采集
1.3.2 大熊猫生殖激素检测方式的发展
1.3.3 ELISA试剂盒在大熊猫上的应用
1.4 半抗原与完全抗原
1.4.1 载体的选择
1.4.2 半抗原活化物与载体的偶联
1.5 本研究的目的及意义
试验研究
第二章 完全抗原与多克隆抗体的制备
2.1 试验材料
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器耗材
2.2 试验方法
2及P4完全抗原的制备与鉴定"> 2.2.1 E2及P4完全抗原的制备与鉴定
2和P4完全抗原的鉴定"> 2.2.2 E2和P4完全抗原的鉴定
2.2.3 试验动物免疫
2.2.4 抗血清的检测
2.3 试验结果
2和P4完全抗原的鉴定"> 2.3.1 E2和P4完全抗原的鉴定
2.3.2 抗血清的检测
2.4 试验讨论
2.4.1 完全抗原的制备与鉴定
2.4.2 多克隆抗体的制备与检测
2.5 试验小结
2和P4 ELISA检测方法的建立"> 第三章 大熊猫尿液中E2和P4 ELISA检测方法的建立
3.1 试验材料
3.2 试验方法
3.2.1 间接竞争ELISA试验基本步骤
3.2.2 酶标板均一性检测
3.2.3 ELISA反应条件的筛选
3.2.4 ELISA标准曲线的绘制
3.2.5 ELISA试剂盒的性能检测
3.2.6 ELISA试剂盒临床尿样检测
3.3 试验结果
3.3.1 酶标板均一性检测结果
2 ELISA试剂盒反应条件的筛选"> 3.3.2 E2 ELISA试剂盒反应条件的筛选
2 ELISA试剂盒的性能检测"> 3.3.3 E2 ELISA试剂盒的性能检测
4 ELISA试剂盒反应条件的筛选"> 3.3.4 P4 ELISA试剂盒反应条件的筛选
4 ELISA试剂盒的性能检测"> 3.3.5 P4 ELISA试剂盒的性能检测
3.3.6 ELISA试剂盒的验证
3.3.7 ELISA试剂盒的临床检验
3.4 试验讨论
2和P4间接竞争ELISA的建立"> 3.4.1 E2和P4间接竞争ELISA的建立
3.4.2 ELISA试剂盒的临床检验
3.5 试验小结
结论
参考文献
附录
致谢
作者简介
本文编号：3066106
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩写词表
文献综述
第一章 大熊猫生殖激素检测研究进展
1.1 秦岭大熊猫的现状
1.2 秦岭大熊猫的生殖激素变化
1.2.1 大熊猫自身的繁殖能力
1.2.2 雌性大熊猫发情期的激素变化
1.2.3 大熊猫妊娠期的激素变化
1.3 生殖激素检测的研究进展
1.3.1 样品的采集
1.3.2 大熊猫生殖激素检测方式的发展
1.3.3 ELISA试剂盒在大熊猫上的应用
1.4 半抗原与完全抗原
1.4.1 载体的选择
1.4.2 半抗原活化物与载体的偶联
1.5 本研究的目的及意义
试验研究
第二章 完全抗原与多克隆抗体的制备
2.1 试验材料
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器耗材
2.2 试验方法
2及P4完全抗原的制备与鉴定"> 2.2.1 E2及P4完全抗原的制备与鉴定
2和P4完全抗原的鉴定"> 2.2.2 E2和P4完全抗原的鉴定
2.2.3 试验动物免疫
2.2.4 抗血清的检测
2.3 试验结果
2和P4完全抗原的鉴定"> 2.3.1 E2和P4完全抗原的鉴定
2.3.2 抗血清的检测
2.4 试验讨论
2.4.1 完全抗原的制备与鉴定
2.4.2 多克隆抗体的制备与检测
2.5 试验小结
2和P4 ELISA检测方法的建立"> 第三章 大熊猫尿液中E2和P4 ELISA检测方法的建立
3.1 试验材料
3.2 试验方法
3.2.1 间接竞争ELISA试验基本步骤
3.2.2 酶标板均一性检测
3.2.3 ELISA反应条件的筛选
3.2.4 ELISA标准曲线的绘制
3.2.5 ELISA试剂盒的性能检测
3.2.6 ELISA试剂盒临床尿样检测
3.3 试验结果
3.3.1 酶标板均一性检测结果
2 ELISA试剂盒反应条件的筛选"> 3.3.2 E2 ELISA试剂盒反应条件的筛选
2 ELISA试剂盒的性能检测"> 3.3.3 E2 ELISA试剂盒的性能检测
4 ELISA试剂盒反应条件的筛选"> 3.3.4 P4 ELISA试剂盒反应条件的筛选
4 ELISA试剂盒的性能检测"> 3.3.5 P4 ELISA试剂盒的性能检测
3.3.6 ELISA试剂盒的验证
3.3.7 ELISA试剂盒的临床检验
3.4 试验讨论
2和P4间接竞争ELISA的建立"> 3.4.1 E2和P4间接竞争ELISA的建立
3.4.2 ELISA试剂盒的临床检验
3.5 试验小结
结论
参考文献
附录
致谢
作者简介
本文编号：3066106
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