产酶溶杆菌中与全局性调控因子Clp蛋白互作的转录因子的鉴定与功能研究

发布时间：2021-03-07 12:16

　　产酶溶杆菌OH11（Lysobacter enzymogenes OH11）是本实验室从辣椒根际土壤中分离得到的一株具有广阔应用前景的重要生防细菌,其能产生多种胞外酶和次生抗菌代谢产物,对多种植物病原真菌、卵菌和革兰氏阳性细菌均有较强的抗菌活性。Clp（cAMP-receptor like protein）是产酶溶杆菌中鉴定的一个转录调控蛋白,属于CRP（cyclic AMP receptor protein）蛋白家族。之前的研究发现,将clp缺失突变以后其产HSAF的能力显著降低,并且HSAF生物合成的关键基因pks/nrps的转录表达也显著下降。本实验室研究发现Clp可以通过直接结合在pks/nrps基因的启动子区来调控HSAF的生物合成。为深入揭示产酶溶杆菌中Clp调控HSAF生物合成的分子机制,本研究通过筛选与Clp蛋白互作的转录因子,从中发现调控HSAF生物合成的目标转录因子。在此基础上,研究该目标转录因子是如何通过与Clp蛋白互作来调控HSAF生物合成的。在本实验室构建的OH11转录因子pTRG文库的基础上,本研究通过细菌双杂交系统筛选到14个与Clp蛋白存在相互作用的转录... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１溶杆菌属几个代表种的细胞形态??Ｆｉｇ．?１－１?Ｃｅｌｌ?ｓｈａｐｅｓ?ｏｆ?ｓｅｖｅｒａｌ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ?ｓｐｅｃｉｅｓ?ｏｆ?Ｌｙｓｏｂａｃｔｃｒ｛＾＾：＾，?２００６）．??

借助于质谱（ＭＳ）和核磁并振技术（ＮＭＲ），Ｙｕ等人鉴定了ＨＳＡＦ的化学结构（Ｙｕ?ｅｔ?ａｌ．，??２００７）。该物质山一个独特的大环内酰胺体系、一个四胺酸结构单元和一个５，５，６－三环??骨架构成（图１＿３），其结构与ｄｉｈｙｄｒｏｍａｌｔｏｐｈｉｌｉｎ类似。??Ｈ?！??！?ＨＳＡＦ?／ｎ－ａ?ｊ??Ｉ?＾５?？??Ｈ０?（Ｄｉｈｙｄｒｏｍａｌｔｏｐｈｉｌｉｎ）?｜??一?—?一—?—?一一—一一?—?—?一一一?—?—?—?一一一?＿?—?—?一?———??图１－３产酶溶杆菌Ｃ３中热稳定抗真菌因子ＨＳＡＦ的化学结构??Ｆｉｇ．?１－３?Ｃｈｅｍｉｃａｌ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＨＳＡＦ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ?ｆｒｏｍ?Ｌ．?ｅｎｚｙｍｏｇｅｎｅｓＣｉ?（Ｙｕ?ｅｔ?ａｌ，?２００７）．??利用生物信息学和分子生物学等手段，Ｙｕ等鉴定了ＨＳＡＦ生物合成基因簇及其生??物合成的关键基因ＰＫＳ／ＮＲＰＳ（图１－４Ａ），并推导出其生物合成的可能途径（图１－４Ｂ）?（Ｙｕ??ｅｔ?ａｌ．

１－６Ａ），对革兰氏阳性细菌有着很好的生防效果。得到产酶溶杆菌ＯＨ１１全基因组后，??Ｚｈａｎｇ等借助分子生物学手段确定了产酶溶杆菌０Ｈ１１中合成ＷＡＰ－８２９４Ａ２的基因簇及??其中的两个关键基因：ＷＡＰＳ１和ＷＡＰＳ２（图１－６Ｂ）。通过质谱（ＭＳ）和核磁共振技术??（ＮＭＲ）?Ｚｈａｎｇ等人分析确定了该物质的结构与ＷＡＰ－８２９４Ａ２相同，并借助生物信息学??和分子生物学手段推测出了ＷＡＰ－８２９４Ａ２可能的生物合成途径（图ｌ－６Ｃ）（Ｚｈａｎｇ?ｅｔ?ａｌ．，??２０１１）。??６??


本文编号：3069077