玉米弯孢叶斑病菌MAPK基因功能及与毒素和黑色素合成相关关系分析
发布时间：2021-03-19 21:43
由新月弯孢霉（Curvularia lunata）侵染引起的玉米弯孢叶斑病是常见且重要的玉米真菌病害。目前,对于该病原菌的致病机理已有了初步的研究,前期工作已证明MAPK信号传递通路在该病原菌的致病性方面起到重要作用,并且主要通过毒素、黑色素侵染寄主,但关于MAPK信号通路与毒素、黑色素合成途径之间关系缺少深入研究。由于病原真菌毒素、黑色素代谢通路的合成过程中与辅酶类物质（乙酰辅酶A、丙二酰辅酶A）有密切关系,但在弯孢叶斑病菌中尚不清楚两者在毒素和色素合成及其与MAPK调控的关系。由此本文首先研究玉米弯孢叶斑病菌MAPK通路中与酿酒酵母中参与调控渗透压的Hog1同源的基因Chl1的功能,同时克隆并分析玉米弯孢叶斑病菌中乙酰辅酶A基因ClMfp的功能,在此基础上研究玉米弯孢叶斑病菌中MAPK信号通路基因与毒素、黑色素及两者合成的前体物质--乙酰辅酶A、丙二酰辅酶A之间可能存在的调控关系。1明确MAPK基因Clh1对病菌致病因子作用的影响通过Blast从玉米弯孢叶斑病菌全基因组序列中获得与酿酒酵母Hog1基因同源性最高的基因序列及其上下游序列,该基因全长2.782kb,cDNA全长1.13...
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：99 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
玉米弯孢叶斑病菌Clh1基因质粒构建流程
上海交通大学硕士学位论文 中混入 2×100%乙醇和 1/10×的 3M CH3COONa 于-20℃保存，半小时后于12000rpm 15min 去除上清，再用 75%乙醇洗两次，13000rpm 5min 去除上清，将沉淀吸干水分后混入 20μL 的 ddH2O 中，跑胶分离条带。用 ddH2O 冲洗电泳后的凝胶 2 次，加入 0.25mol/L 的 HCl 溶液静置 15min 脱嘌呤，再用 ddH2O 冲洗2 次。随后加入变性液（1.5M NaCl 和 0.5M NaOH），慢摇 30min，ddH2O 冲洗2 次，重复一次。然后加入中和液（含 1.5M NaCl 和 1M Trisbase ,调至 pH7.5），慢摇 30min，ddH2O 冲洗 2 次，重复一次。将尼龙膜裁剪成有凝胶尺寸相同的大小进行转膜[112]，膜转好后置于两张滤纸之间，烘箱调至 80℃，将膜放入静置 2h，随后于 4℃保存。标记，杂交，洗膜，压光片依据 Gene Images CDP-Star Detection kit (Amersham, UK)中的操作手册进行。 CX-3 和△Clh1 的 DNA 用两个快切酶 Hind III 和 EcoR I 检测。两个探针见图 2-2。
上海交通大学硕士学位论文 CG GAT TTG GAT TTT CTC AAT GACC CAT GGC ATG AAG ATG GGC GCT CTG TCA TTT GGA TTA GCA CTCA TGA CGC GAT TGG GGG CAT GAT TAT GTT GTC AAA CAA TGC GGC GTT CGC CGT GGC GGT CCA AGC CCA AAT CGG CCT AGT CCC AAC GGG TGC TCT TCG TCA CCG CCT AGG ACC TAA GCC CGG CCC CC AAA CCT GAC CGC CGT GCG ATTG GCG ACG CTT CAT CCT CTT GG CGG TAA GCG GCT CTG GCT GCAC ATT GCT AAC TAC AAT GCT AGG CTT GGA GCA GAA GAG GGA AAC TGG TCC CTC CTG CCT TTT ATCC TCG ACC GAA GAC TAC TCG TCC TCG ACT GAA CCT GCG ACC TGC
【参考文献】：
期刊论文
[1]稻曲病菌PMK1类同源基因克隆及在稻瘟病菌遗传互补中的功能验证[J]. 张震,杜新法,柴荣耀,王教瑜,邱海萍,毛雪琴,孙国昌. 微生物学报. 2008(11)
[2]玉米弯孢菌叶斑病时间流行动态分析及产量损失测定[J]. 李金堂,傅俊范,严雪瑞,李海春,周如军. 沈阳农业大学学报. 2006(06)
[3]玉米弯孢菌叶斑病发生和防治若干问题研究[J]. 王春,陈立梅,郭晓勤,吕宙明,高洁. 玉米科学. 2006(02)
[4]不同玉米品种对小斑病和弯孢霉叶斑病的抗病性分析[J]. 邢光耀,杜学林. 西北农业学报. 2006(01)
[5]玉米弯孢菌叶斑病发病规律及影响因子研究[J]. 臧少先,张义奇,石丽军,狄继革,赵来顺. 河北农业科学. 2005(02)
[6]玉米大斑病菌HT-毒素组分Ⅱ的化学结构[J]. 董金皋,周宗山,李正平. 植物病理学报. 2000(02)
[7]玉米弯孢菌叶斑病研究[J]. 戴法超,王晓鸣,朱振东,高卫东,霍纳新,金晓华. 植物病理学报. 1998(02)
[8]河北省丝孢菌的研究 Ⅱ、弯孢属[J]. 吴文平. 河北省科学院学报. 1990(02)
硕士论文
[1]玉米弯孢霉叶斑病菌Clm1基因的克隆与功能分析[D]. 王嘉渊.上海交通大学 2011
本文编号：3090276
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：99 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
玉米弯孢叶斑病菌Clh1基因质粒构建流程
上海交通大学硕士学位论文 中混入 2×100%乙醇和 1/10×的 3M CH3COONa 于-20℃保存，半小时后于12000rpm 15min 去除上清，再用 75%乙醇洗两次，13000rpm 5min 去除上清，将沉淀吸干水分后混入 20μL 的 ddH2O 中，跑胶分离条带。用 ddH2O 冲洗电泳后的凝胶 2 次，加入 0.25mol/L 的 HCl 溶液静置 15min 脱嘌呤，再用 ddH2O 冲洗2 次。随后加入变性液（1.5M NaCl 和 0.5M NaOH），慢摇 30min，ddH2O 冲洗2 次，重复一次。然后加入中和液（含 1.5M NaCl 和 1M Trisbase ,调至 pH7.5），慢摇 30min，ddH2O 冲洗 2 次，重复一次。将尼龙膜裁剪成有凝胶尺寸相同的大小进行转膜[112]，膜转好后置于两张滤纸之间，烘箱调至 80℃，将膜放入静置 2h，随后于 4℃保存。标记，杂交，洗膜，压光片依据 Gene Images CDP-Star Detection kit (Amersham, UK)中的操作手册进行。 CX-3 和△Clh1 的 DNA 用两个快切酶 Hind III 和 EcoR I 检测。两个探针见图 2-2。
上海交通大学硕士学位论文 CG GAT TTG GAT TTT CTC AAT GACC CAT GGC ATG AAG ATG GGC GCT CTG TCA TTT GGA TTA GCA CTCA TGA CGC GAT TGG GGG CAT GAT TAT GTT GTC AAA CAA TGC GGC GTT CGC CGT GGC GGT CCA AGC CCA AAT CGG CCT AGT CCC AAC GGG TGC TCT TCG TCA CCG CCT AGG ACC TAA GCC CGG CCC CC AAA CCT GAC CGC CGT GCG ATTG GCG ACG CTT CAT CCT CTT GG CGG TAA GCG GCT CTG GCT GCAC ATT GCT AAC TAC AAT GCT AGG CTT GGA GCA GAA GAG GGA AAC TGG TCC CTC CTG CCT TTT ATCC TCG ACC GAA GAC TAC TCG TCC TCG ACT GAA CCT GCG ACC TGC
【参考文献】：
期刊论文
[1]稻曲病菌PMK1类同源基因克隆及在稻瘟病菌遗传互补中的功能验证[J]. 张震,杜新法,柴荣耀,王教瑜,邱海萍,毛雪琴,孙国昌. 微生物学报. 2008(11)
[2]玉米弯孢菌叶斑病时间流行动态分析及产量损失测定[J]. 李金堂,傅俊范,严雪瑞,李海春,周如军. 沈阳农业大学学报. 2006(06)
[3]玉米弯孢菌叶斑病发生和防治若干问题研究[J]. 王春,陈立梅,郭晓勤,吕宙明,高洁. 玉米科学. 2006(02)
[4]不同玉米品种对小斑病和弯孢霉叶斑病的抗病性分析[J]. 邢光耀,杜学林. 西北农业学报. 2006(01)
[5]玉米弯孢菌叶斑病发病规律及影响因子研究[J]. 臧少先,张义奇,石丽军,狄继革,赵来顺. 河北农业科学. 2005(02)
[6]玉米大斑病菌HT-毒素组分Ⅱ的化学结构[J]. 董金皋,周宗山,李正平. 植物病理学报. 2000(02)
[7]玉米弯孢菌叶斑病研究[J]. 戴法超,王晓鸣,朱振东,高卫东,霍纳新,金晓华. 植物病理学报. 1998(02)
[8]河北省丝孢菌的研究 Ⅱ、弯孢属[J]. 吴文平. 河北省科学院学报. 1990(02)
硕士论文
[1]玉米弯孢霉叶斑病菌Clm1基因的克隆与功能分析[D]. 王嘉渊.上海交通大学 2011
本文编号：3090276
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/dzwbhlw/3090276.html
