崇明拟异小杆线虫二种单菌线虫差异表达新microRNAs靶基因的鉴定
发布时间：2021-04-06 21:40
昆虫病原线虫（Entomopathogenicnematodes,EPN）指以昆虫为寄主的致病性线虫,其致病性源自于其肠道内所携带的共生菌,二者呈互惠共生关系。目前已发现的昆虫病原线虫有3大类,分别是小杆科（Rhabditidae）拟异小杆属（Heterorhabditidoides）、异小杆科（Heterorhabditidae）和斯氏线虫科（Steinernematidae）。本研究试材崇明拟异小杆（Heterorhabditidoides chongmingensis）线虫为本实验室在上海崇明岛分离到的EPN新种,其与嗜线虫沙雷氏菌（Serratia nematodiphila）共生。前期研究运用Solexa高通量测序技术对崇明拟异小杆线虫的模式品系DZ0503CMFT（DZ）与其自身共生菌DZ0503SBS1T（S1）和非自身共生菌DR186（186）构建形成的单菌线虫组合DZ-S1和DZ-186的小RNA文库进行测序,两文库中新型miRNA的表达量具有显著差异。本研究选取显著上调的n-miR-10和n-miR-9进行研究,获得以下主要研究结果:扩增差异表达的n-miR-9和n...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：100 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１昆虫病原线虫生活史??Ｆｉｇ?１－１．?Ｔｈｅ?Ｌｉｆｅ?Ｃｙｃｌｅ?ｏｆ?Ｅｎｔｏｍｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ?Ｎｅｍａｔｏｄｅｓ?（Ｄｉｈｏｎｇ?Ｌｕ，?ｅｔ?ａｌ，?２０１６）??
运蛋白ｅｘｐｏｒｔｉｎ－５的作用下，从细胞核中运输到细胞质，被另一个??ＲＮａｓｅ?ＩＩＩ酶Ｄｉｃｅｒ将前体加工成２卜２４个核苷酸的双链ｍｉＲＮＡ。然后将注定成为成熟??序列的那条链与Ａｒｇｏｎａｕｔｅ蛋白相结合，并与其他蛋白质一起形成ｍｉＲＮＡ诱导沉默??复合物（ＲＮＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ?ｃｏｍｐｌｅｘ，?ＲＩＳＣ）。ＲＩＳＣ?上的?ｍｉＲＮＡ?使用不完美的碱??基互补配对与特异性的ｍＲＮＡ相结合，引发ｒｎＲＮＡ不稳定或翻译抑制来调控ｍＲＮＡ??在生物体中的表达。（图１－２）??｜?＼?ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ?ｍＲＮＡ?ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ??ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ?＼?７??ｍ７Ｇ—＾?Ｉ?ｍ７ＧＺ＾、?’?ＡＡＡ??ｌ?？?ｍａｔｕｒｅ?ｍｉＲＮＡ??Ｉ?，??—？?ａｍ〇Ｔ??ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ?Ｔｍｆ＞ｎ?’?ＢＢ??ｓｔａｒ／?ｐａｓｓｅｎｇｅｒ??Ｊ?ｓｔｒａｎｄ?ｍｉＲＮＡ??ｎｕｃｌｅｕｓ?／?ｃｙｔｏｐｌａｓｍ??图１－２?ｍｉＲＮＡ生物合成过程??Ｆｉｇ?１－２．?Ｔｈｅ?Ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ｍｉＲＮＡ?Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ?（Ｆｉｎｎｅｇａｎ?Ｅ?Ｆ，?Ｐａｓｑｕｉｎｅｌｌｉ?ＡＥ．?２０１３）??大多数核转运受体都是使用辅因子Ｒａｎ－ＧＴＰ将ＲＮＡ导出细胞核，一旦细胞质中??的ＧＴＰ水解成ＧＤＰ就可以释放ＲＮＡ至细胞质［１１５］。ｅｘｐｏｒｔｍ－５在体内和体外均依赖??Ｒａｎ－ＧＴＰ的方式，以高亲和力结合ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ。ｅｘｐｏｒｔｉｎ－５的丧失则会导致细胞质中??ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ的减少，因此体内ｍｉＲＮＡ水平也会随
?第二章ｍｉＲＮＡ过表达载体的构建以及定量检测???２结果与分析??２．１?ｎ－ｍｉＲ－９与ｎ－ｍｉＲ－１０前体的扩增??２．１．１?ＤＺ线虫总ＲＮＡ白勺提取??提取的ＤＺ线虫总ＲＮＡ，取５?ｐｉ走１％琼脂糖凝胶电泳，结果如图２－１。在凝胶??电泳图上可以看到有４条明显的条带，其中最上面的条带为基因组ＤＮＡ，可在反转??录前加入ＤＮＡ酶处理。其余的３条带从点样孔从上往下依次是２８Ｓ，?１８Ｓ和５Ｓ，其??中２８Ｓ和１８Ｓ的条带非常清晰，而５Ｓ的带比较弱，且２８Ｓ的条带的亮度是１８Ｓ条带??亮度的２倍左右，说明提取到的ＲＮＡ完整性保持的比较好，没有被降解，１号样和２??号样用于反转录使用。??２?１?Ｍ??ｍｉ??ＬＸｍ??ｍｌ??图２－１?ＤＺ线虫总ＲＮＡ的凝胶电泳??Ｆｉｇ．?２－１?Ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＲＮＡ?ｅｘｔｒａｃｔｅｄ?ｆｒｏｍ?ＤＺ??２．１．２?ＤＺ线虫总ＲＮＡ白勺检测??表２－７?ＤＺ线虫总ＲＮＡ检测结果??Ｔａｂｌｅ?２－７?Ｔｈｅ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ??ＲＮＡ?浓度（ｎｇ／（ｉｌ）?ＡｊＷＡａｃｉ?＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿??１?号样?３０７２．０?２．０４??２?号样?４１８４．４?２．１０??２３??
【参考文献】：
硕士论文
[1]基于高通量测序的崇明拟异小杆线虫与共生菌共生相关microRNAs的鉴定及作用机制[D]. 李朋朋.南京农业大学 2015
[2]拟异小杆类昆虫病原线虫与其共生菌共生专化性、稳定性及其致病性研究[D]. 王莹.南京农业大学 2013
本文编号：3122198
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：100 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１昆虫病原线虫生活史??Ｆｉｇ?１－１．?Ｔｈｅ?Ｌｉｆｅ?Ｃｙｃｌｅ?ｏｆ?Ｅｎｔｏｍｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ?Ｎｅｍａｔｏｄｅｓ?（Ｄｉｈｏｎｇ?Ｌｕ，?ｅｔ?ａｌ，?２０１６）??
运蛋白ｅｘｐｏｒｔｉｎ－５的作用下，从细胞核中运输到细胞质，被另一个??ＲＮａｓｅ?ＩＩＩ酶Ｄｉｃｅｒ将前体加工成２卜２４个核苷酸的双链ｍｉＲＮＡ。然后将注定成为成熟??序列的那条链与Ａｒｇｏｎａｕｔｅ蛋白相结合，并与其他蛋白质一起形成ｍｉＲＮＡ诱导沉默??复合物（ＲＮＡ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ?ｃｏｍｐｌｅｘ，?ＲＩＳＣ）。ＲＩＳＣ?上的?ｍｉＲＮＡ?使用不完美的碱??基互补配对与特异性的ｍＲＮＡ相结合，引发ｒｎＲＮＡ不稳定或翻译抑制来调控ｍＲＮＡ??在生物体中的表达。（图１－２）??｜?＼?ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ?ｍＲＮＡ?ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ??ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ?＼?７??ｍ７Ｇ—＾?Ｉ?ｍ７ＧＺ＾、?’?ＡＡＡ??ｌ?？?ｍａｔｕｒｅ?ｍｉＲＮＡ??Ｉ?，??—？?ａｍ〇Ｔ??ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ?Ｔｍｆ＞ｎ?’?ＢＢ??ｓｔａｒ／?ｐａｓｓｅｎｇｅｒ??Ｊ?ｓｔｒａｎｄ?ｍｉＲＮＡ??ｎｕｃｌｅｕｓ?／?ｃｙｔｏｐｌａｓｍ??图１－２?ｍｉＲＮＡ生物合成过程??Ｆｉｇ?１－２．?Ｔｈｅ?Ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ｍｉＲＮＡ?Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ?（Ｆｉｎｎｅｇａｎ?Ｅ?Ｆ，?Ｐａｓｑｕｉｎｅｌｌｉ?ＡＥ．?２０１３）??大多数核转运受体都是使用辅因子Ｒａｎ－ＧＴＰ将ＲＮＡ导出细胞核，一旦细胞质中??的ＧＴＰ水解成ＧＤＰ就可以释放ＲＮＡ至细胞质［１１５］。ｅｘｐｏｒｔｍ－５在体内和体外均依赖??Ｒａｎ－ＧＴＰ的方式，以高亲和力结合ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ。ｅｘｐｏｒｔｉｎ－５的丧失则会导致细胞质中??ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ的减少，因此体内ｍｉＲＮＡ水平也会随
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【参考文献】：
硕士论文
[1]基于高通量测序的崇明拟异小杆线虫与共生菌共生相关microRNAs的鉴定及作用机制[D]. 李朋朋.南京农业大学 2015
[2]拟异小杆类昆虫病原线虫与其共生菌共生专化性、稳定性及其致病性研究[D]. 王莹.南京农业大学 2013
本文编号：3122198
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