西方蜜蜂（Apis mellifera）19 kDa血淋巴蛋白HP19的表达与功能研究
发布时间：2021-04-11 08:16
昆虫血淋巴19kDa蛋白（HP19）主要负责调控昆虫的变态发育。蜜蜂是社会性昆虫,蜂群内三种大小、重量、发育历期及生物学功能完全不同的工蜂、雄蜂和蜂王组成,且在其基因组内发现了hp19基因,这为研究hp19对蜜蜂发育及其调控机制提供了很好的材料。基因的功能与其在生物体内的时空表达特性密切相关,为探究hp19在西方蜜蜂Apis mellifera三型蜂体内的表达和功能,本研究利用实时荧光定量PCR技术对hp19在西方蜜蜂工蜂,雄蜂,蜂王各个发育阶段的转录水平进行测定。测定的结果显示,hp19基因在工蜂3龄幼虫阶段高表达,表达量为参照基因的103-104倍,5龄幼虫阶段显著降低到参照的10-102倍,末龄幼虫表达量最低,与参照基因处在同一水平。雄蜂在末龄幼虫阶段表达量也由3龄幼虫参照基因的104-105倍降至最低的102倍。蜂王在幼虫期表达量稳定保持在参照的102倍,封盖后逐渐上升,至化蛹前达到104-105倍。羽化...
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 血淋巴蛋白HP19的研究概述
1 昆虫储存蛋白hexamerin
2 昆虫血淋巴蛋白HP19
2.1 HP19对昆虫变态发育的调控作用
2.2 非基因水平下的激素调节作用
3 实时荧光定量PCR（FQ-PCR）技术
4 RNAi技术及应用
4.1 RNAi的作用机制
4.2 RNAi在昆虫及蜜蜂研究中的应用
5 本实验的研究意义及拟解决的问题
第二章 西方蜜蜂体内hp19的表达
1 材料和方法
1.1 实验材料
1.2 试验方法
2 实验结果与分析
2.1 hp19定量引物验证
2.2 扩增效率及特异性
2.3 hp19在意大利蜜蜂体内的表达
3 结论与讨论
第三章 不同发育时期西方蜜蜂脂肪体细胞膜蛋白磷酸化程度
1 材料和方法
1.1 实验材料
1.2 试验方法
2 结果与分析
2.1 膜蛋白SDS-PAGE电泳结果
2.2 膜蛋白磷酸化测定结果
3 结论与讨论
第四章 合成dsRNA干扰西方蜜蜂hp19基因的表达
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 试验方法
2 结果与分析
2.1 hp19干扰引物验证
2.2 纯化的hp19和egfp dsRNA凝胶电泳
2.3 dsRNA注射工蜂幼虫与实验室条件下的饲养
2.4 半定量验证注射干扰结果
3 结论与讨论
第五章 总结与展望
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]王浆主蛋白MRJP7基因在意大利蜜蜂体内的表达[J]. 李晓燕,梁庆环,杨文静,梁勤,李江红. 环境昆虫学报. 2016(02)
[2]RNA干扰沉默KAT基因对蜜蜂合成10-HDA的影响[J]. 刘丽,杨晓慧,王瑞明. 中国生物工程杂志. 2016(04)
[3]草鱼铜锌超氧化物歧化酶全长cDNA的克隆与组织表达[J]. 郑清梅,温茹淑,韩春艳,钟艳梅,侯雨文. 基因组学与应用生物学. 2014(06)
[4]西方蜜蜂不同级型王浆主蛋白MRJP8基因的表达差异[J]. 李江红,梁庆环,陈大福,梁勤. 昆虫学报. 2014(01)
[5]昆虫RNAi技术与方法[J]. 田宏刚,刘同先,张文庆. 应用昆虫学报. 2013(05)
[6]在发育性变化相关基因表达特性检测中内参基因的有效性和实时定量PCR解析方法的适用性[J]. 胡艳,宋迟,徐文娟,章双杰,李慧芳. 基因组学与应用生物学. 2013(02)
[7]中华蜜蜂与意大利蜜蜂雄蜂胚胎发育差异蛋白质组与磷酸化蛋白质组分析[J]. 周天娥,房宇,冯毛,韩宾,张兰,李荣丽,李建科. 中国农业科学. 2013(02)
[8]PK-15细胞膜蛋白提取方法的比较及猪瘟病毒膜表面受体的初步鉴定[J]. 周斌,刘晓东,王凤鹃,刘珂,陈溥言. 畜牧与兽医. 2011(05)
[9]实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用[J]. 陈旭,齐凤坤,康立功,李景富. 东北农业大学学报. 2010(08)
[10]PepT1基因绝对荧光定量PCR标准曲线的建立[J]. 李慧锋,李丽,张丽娟,徐玉良,李武峰. 山西农业大学学报(自然科学版). 2010(04)
硕士论文
[1]家蚕膜蛋白BmOBP2的分离纯化及结晶条件初探[D]. 刘玲玲.浙江理工大学 2012
[2]蜜蜂球囊菌侵染蜜蜂幼虫的生物学与病理学研究[D]. 郑志阳.福建农林大学 2010
本文编号：3130906
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 血淋巴蛋白HP19的研究概述
1 昆虫储存蛋白hexamerin
2 昆虫血淋巴蛋白HP19
2.1 HP19对昆虫变态发育的调控作用
2.2 非基因水平下的激素调节作用
3 实时荧光定量PCR（FQ-PCR）技术
4 RNAi技术及应用
4.1 RNAi的作用机制
4.2 RNAi在昆虫及蜜蜂研究中的应用
5 本实验的研究意义及拟解决的问题
第二章 西方蜜蜂体内hp19的表达
1 材料和方法
1.1 实验材料
1.2 试验方法
2 实验结果与分析
2.1 hp19定量引物验证
2.2 扩增效率及特异性
2.3 hp19在意大利蜜蜂体内的表达
3 结论与讨论
第三章 不同发育时期西方蜜蜂脂肪体细胞膜蛋白磷酸化程度
1 材料和方法
1.1 实验材料
1.2 试验方法
2 结果与分析
2.1 膜蛋白SDS-PAGE电泳结果
2.2 膜蛋白磷酸化测定结果
3 结论与讨论
第四章 合成dsRNA干扰西方蜜蜂hp19基因的表达
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 试验方法
2 结果与分析
2.1 hp19干扰引物验证
2.2 纯化的hp19和egfp dsRNA凝胶电泳
2.3 dsRNA注射工蜂幼虫与实验室条件下的饲养
2.4 半定量验证注射干扰结果
3 结论与讨论
第五章 总结与展望
参考文献
附录
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]王浆主蛋白MRJP7基因在意大利蜜蜂体内的表达[J]. 李晓燕,梁庆环,杨文静,梁勤,李江红. 环境昆虫学报. 2016(02)
[2]RNA干扰沉默KAT基因对蜜蜂合成10-HDA的影响[J]. 刘丽,杨晓慧,王瑞明. 中国生物工程杂志. 2016(04)
[3]草鱼铜锌超氧化物歧化酶全长cDNA的克隆与组织表达[J]. 郑清梅,温茹淑,韩春艳,钟艳梅,侯雨文. 基因组学与应用生物学. 2014(06)
[4]西方蜜蜂不同级型王浆主蛋白MRJP8基因的表达差异[J]. 李江红,梁庆环,陈大福,梁勤. 昆虫学报. 2014(01)
[5]昆虫RNAi技术与方法[J]. 田宏刚,刘同先,张文庆. 应用昆虫学报. 2013(05)
[6]在发育性变化相关基因表达特性检测中内参基因的有效性和实时定量PCR解析方法的适用性[J]. 胡艳,宋迟,徐文娟,章双杰,李慧芳. 基因组学与应用生物学. 2013(02)
[7]中华蜜蜂与意大利蜜蜂雄蜂胚胎发育差异蛋白质组与磷酸化蛋白质组分析[J]. 周天娥,房宇,冯毛,韩宾,张兰,李荣丽,李建科. 中国农业科学. 2013(02)
[8]PK-15细胞膜蛋白提取方法的比较及猪瘟病毒膜表面受体的初步鉴定[J]. 周斌,刘晓东,王凤鹃,刘珂,陈溥言. 畜牧与兽医. 2011(05)
[9]实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用[J]. 陈旭,齐凤坤,康立功,李景富. 东北农业大学学报. 2010(08)
[10]PepT1基因绝对荧光定量PCR标准曲线的建立[J]. 李慧锋,李丽,张丽娟,徐玉良,李武峰. 山西农业大学学报(自然科学版). 2010(04)
硕士论文
[1]家蚕膜蛋白BmOBP2的分离纯化及结晶条件初探[D]. 刘玲玲.浙江理工大学 2012
[2]蜜蜂球囊菌侵染蜜蜂幼虫的生物学与病理学研究[D]. 郑志阳.福建农林大学 2010
本文编号：3130906
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